蘚類植物回心草的化學成分和生物活性研究.pdf

1、蘚類植物是生物多樣性的重要組成成分，雖然未正式成為藥用植物，但早在16世紀就有用蘚類植物如真蘚屬、澤蘚屬治療創(chuàng)傷的記錄[1]。蘚類植物雖然分布面積較廣，但密度較小，種間雜生，不易區(qū)別和分離，難以大量采集，對其進行化學成分的研究長期受到忽視，隨著分析技術不斷進步，蘚類植物化學成分的研究才取得一定進展。 本文研究的回心草為真蘚科植物紅大葉蘚Rhodobryumroseum(Hedw)Limpr的干燥全草[2]《云南中草藥選》中記載其

2、能“性平微苦，具有消炎，鎮(zhèn)靜，壯陽等性能，全株入藥，主治心臟病，神經衰弱，陽萎等癥”[3]。廣泛分布在我國的華東、華北、東北、西南等地區(qū)，云南省為主產地。我們曾報道從中發(fā)現(xiàn)了生物堿、三萜類等化合物[4]，本文繼續(xù)對紅大葉蘚中的其它化學成分、藥理作用及其作用機制進行研究。 從紅大葉蘚R.roseum(Hedw)Limpr的乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物部分和水部分共分離得到26個化合物，運用多種現(xiàn)代波譜技術鑒定了其中23個化合物的化學

3、結構和立體構型。這些化合物包括5個五環(huán)三萜類化合物：齊墩果酸(oleanolicacid)(1)，2α-羥基齊墩果(2α-hydroxyoleanolicacid)(2)，烏蘇酸(ursolicacid)(3)，2α-羥基烏蘇酸(2α-hydroxyursolicacid)(4)，木栓酮(friedelin)(5)；1個貝殼杉烷型二萜苷類化合物：甜菊苷(stevioside)(6)；2個黃酮類化合物：芹菜素(apigenin)(7)，槲

4、皮素(quercetin)(8)；4個酚酸類化合物：咖啡酸(caffeicacid)(9)，原兒茶酸(protocatechuicacid)(10)，對羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoicacid)(11)，對羥基桂皮酸(p-hydroxycinnamicacid)(12)；6個直鏈脂肪酸：棕櫚酸(palmicacid)(13)，正二十六碳酸(n-hexacosanoicacid)(14)，正二十八碳酸(n-octacosano

5、icacid)(15)，正三十碳酸(n-triacontanoicacid)(16)，琥珀酸(succinicacid)(17)，己二酸(adipicacid)(18)；1個生物堿類化合物：尿囊素(allantoin)(19)；1個聯(lián)苯類化合物：3，5，3'，5'-四甲氧基-4,4'-聯(lián)苯二酚(3，5，3'，5'-tetramethoxy-4,4'-diphenol)(20)；1個糖類化合物：果糖(fructose)(21)；2個甾醇類

6、化合物：β-谷甾醇(β-sitosterol)(22)，胡蘿卜甙(daucosterol)(23)。其中，除了化合物3、5、22和23外其它19個化合物均為首次從該屬植物當中獲得。 采用實驗性心肌缺血模型，觀察回心草乙酸乙酯部位及從中分離得到的各單體成分胡椒堿、胡椒酸甲酯、咖啡酸甲酯、尿嘧啶苷對血流動力學的影響。實驗結果表明，停止灌流30min后可造成心肌明顯缺血缺氧，與正常組比較，對照組冠脈流量(CF)、心律(HR)、左室收縮

7、壓(LVSP)、左室最大下降速率(+dP/dtmax)顯著下降，左室最大上升速率(-dP/dtmax)顯著上升；乙酸乙酯部分(EA)和尿嘧啶苷(高、中劑量)、胡椒酸甲酯和咖啡酸甲酯(高、低劑量)、胡椒堿高劑量可顯著升高缺血心臟的LVSP、增加冠脈流量；EA高、中劑量，尿嘧啶苷中、低劑量可使其+dP/dtmax明顯恢復；除EA、尿嘧啶苷低劑量外，其他各組均可顯著減少-dP/dtmax的上升幅度，提示回心草乙酸乙酯部位和各單體成分可通過促進

8、心肌缺血缺氧后收縮力的恢復，增加心肌冠脈血流量，從而增強心肌對缺血缺氧的耐受性，發(fā)揮顯著的心肌保護作用，其中乙酸乙酯活性部位的作用好于各單體成分，未見明顯的劑量依賴性。 采用過氧化氫誘導心肌細胞損傷模型，觀察回心草中分離得到的單體化合物齊墩果酸、2α-羥基齊墩果酸、2α-羥基烏蘇酸、芹菜素、槲皮素、咖啡酸的抗氧化作用。實驗結果顯示：過氧化氫可造成心肌細胞明顯缺血缺氧，與空白組比較，模型組肌酸激酶同功酶(CK-MB)和乳酸脫氫酶(

9、LDH)顯著升高；芹菜素高劑量、槲皮素高劑量、咖啡酸各劑量均能夠明顯的降低過氧化氫作用后的損傷的心肌細胞CK-MB值；芹菜素(高、中劑量)、槲皮素(高、中劑量)、咖啡酸高劑量可顯著降低缺血心肌細胞的LDH值。提示黃酮類的芹菜素和槲皮素可改善缺血缺氧的心肌細胞的活力。黃酮類化合物是天然抗氧化劑，具有抗脂質過氧化和抗活性氧自由基的作用，本研究中芹菜素和槲皮素通過抗氧化而減輕過氧化氫對心肌細胞的損傷；咖啡酸各劑量對CK-MB值均有顯著的降低作

10、用，但只有高劑量對LDH值有顯著影響，因此咖啡酸對過氧化氫損傷的心肌細胞有保護作用；齊墩果酸、2α-羥基齊墩果酸、2α-羥基烏蘇酸三種三萜對心肌細胞的缺血缺氧損傷無統(tǒng)計學意義，提示三萜類化合物是否具有該活性還需進一步的研究。 采用RT-PCR技術觀察回心草單體成分胡椒堿對心肌β1受體的基因表達的影響，初步探討胡椒堿抗心肌缺血缺氧的作用機制。實驗結果表明：連續(xù)3d腹腔注射異丙腎上腺素(iso)后，模型組動物的心肌β1受體基因較之空