銀線(xiàn)草的化學(xué)成分及生物活性研究.pdf

1、金粟蘭屬（Chloranthus）是金粟蘭科(Chloranthaceae)中的一屬，該屬植物為多年生草本或半灌木，全世界約17種，主要分布于亞洲的溫帶和熱帶。其中在我國(guó)分布的約13個(gè)種及5個(gè)變種，多集中分布在我國(guó)西南地區(qū)。金粟蘭屬植物具有祛風(fēng)散寒，活血散瘀，消腫止痛，舒筋強(qiáng)骨等傳統(tǒng)功效，作為民間用藥通常多被用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷等疾病。目前為止，研究表明，本屬植物的化學(xué)成分在結(jié)構(gòu)上呈現(xiàn)出多樣性和復(fù)雜性，類(lèi)型主要為萜類(lèi)及其聚合物

2、，其次還有香豆素、黃酮類(lèi)、酰胺類(lèi)化學(xué)成分;關(guān)于其藥理活性的報(bào)道主要集中在抗炎、抗腫瘤、K+離子通道的選擇性抑制、抗病毒、抗菌等方面。
　　金粟蘭屬植物銀線(xiàn)草Chloranthus japonicus Sieb又名四葉草，鬼督郵等，在我國(guó)主要分布于吉林、黑龍江、陜西、甘肅、河北等省，在日本、朝鮮也有分布。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道來(lái)看，銀線(xiàn)草中的主要化學(xué)成分類(lèi)型是倍半萜及其二聚體。結(jié)構(gòu)新穎的倍半萜及其聚合物以及它們的功能研究一直是本課題組的主要研

3、究方向之一。因此，選取銀線(xiàn)草全草作為本課題的研究對(duì)象，對(duì)其所含的倍半萜類(lèi)成分及其聚合物進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。同時(shí)，對(duì)獲得的銀線(xiàn)草部分倍半萜類(lèi)成分及其二聚體進(jìn)行生物活性研究。
　　一、化學(xué)成分研究
　　本課題對(duì)銀線(xiàn)草全草乙醇提取物運(yùn)用各種色譜技術(shù)（正相色譜、凝膠色譜、反相色譜、大孔樹(shù)脂色譜、薄層色譜、HPLC等）和多種光譜技術(shù)(HRESIMS、NMR、CD、OR、X-ray等)共分離鑒定了55個(gè)化合物，其中包括倍半萜有42個(gè)

4、，類(lèi)型分別為桉葉烷型、吉瑪烷型、孤木烷型、愈創(chuàng)木烷型、烏藥烷型倍半萜及其二聚體，其他類(lèi)型萜類(lèi)及其苷有5個(gè)，甾體類(lèi)有2個(gè)，黃酮類(lèi)有4個(gè)，其他類(lèi)型有2個(gè)。首次從該植物中分離到的化合物數(shù)共31個(gè)。
　　化合物Y-1，Y-2，Y-3，Y-4，Y-19，Y-20，Y-21，Y-25，Y-30被鑒定為新化合物?；衔颵-1～Y-4為新的桉葉烷型倍半萜，其中化合物Y-1是首次發(fā)現(xiàn)8，9位裂環(huán)桉烷型倍半萜，利用CD數(shù)據(jù)，確定其C-12位的羥基構(gòu)型

5、;化合物Y-19為新的吉瑪烷型倍半萜，化合物Y-20和Y-21為新的愈創(chuàng)木烷型倍半萜，化合物Y-25和Y-30為新的烏藥烷型倍半萜，且化合物Y-30是比較罕見(jiàn)的具有過(guò)氧羥基結(jié)構(gòu)的烏藥烷型倍半萜內(nèi)酯二聚體。另外，我們通過(guò)X-射線(xiàn)單晶衍射實(shí)驗(yàn)獲取了化合物Y-2，Y-3，Y-20和Y-21的單晶數(shù)據(jù)。
　　二、生物活性研究
　　采用CCK-8法對(duì)分離得到的倍半萜類(lèi)化合物進(jìn)行體外5種腫瘤細(xì)胞株毒性篩選（胃癌細(xì)胞MGC803、肝癌細(xì)胞

6、HepG2、人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、人肺癌細(xì)胞A549）。結(jié)果顯示，倍半萜單倍體均未顯示明顯的腫瘤細(xì)胞毒性，僅有部分烏藥烷型倍半萜內(nèi)酯二聚體化合物顯示出對(duì)腫瘤細(xì)胞毒性。其中不具有十八元內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物Y-39對(duì)胃癌細(xì)胞MGC803、肝癌細(xì)胞HepG2、人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60的增殖具有很強(qiáng)的抑制作用，其IC50值分別為4.60±1.05μM、3.17±0.66μM、1.57±0.27μM，而化合物Y

7、-35、36對(duì)HL-60人早幼粒白血病細(xì)胞增殖抑制作用較弱，其IC50值分別為10.28±0.70μM、10.19±2.28μM，化合物Y-36對(duì)MGC803胃癌細(xì)胞增殖有較弱抑制作用，IC50值為15.81±5.92μM。
　　體外抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7一氧化氮釋放篩選實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，化合物Y-2具有顯著抑制NO釋放的作用，其IC50值為9.56±0.71μM，且與陽(yáng)性對(duì)照藥氨基胍的活性相當(dāng)，IC50值為8.50