放線菌769對水稻抗稻瘟病的誘導抗性研究.pdf

1、本研究所使用的供試菌種為放線菌769(Streptomyces ahygroscopicus gongzhulingensis n.var.Ruan.et Zhang.1974)，該菌種于1974年從吉林省農業(yè)科學院溫室土壤中分離出來，是一種對多種病原菌有抑制作用的拮抗鏈霉菌。本研究探討了769菌株在防治水稻稻瘟病方面的應用情況，對該菌種的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行了搖瓶發(fā)酵條件優(yōu)化，確定了最佳發(fā)酵條件下769菌株發(fā)酵液的抑菌譜，測定了最

2、佳發(fā)酵條件下發(fā)酵液的穩(wěn)定性，并用不同濃度的發(fā)酵液處理水稻幼苗，在不同的時間對水稻秧苗中三種主要防御酶(過氧化氫酶，CAT；過氧化物酶，POD；苯丙氨酸解氨酶，PAL)活性變化規(guī)律進行檢測。本研究拓展了769菌種的應用空間，為今后該拮抗放線菌的開發(fā)和應用提供一定理論依據和技術支持。 本文對影響菌株769抑菌活性的發(fā)酵培養(yǎng)基組分進行了優(yōu)化，通過對放線菌發(fā)酵培養(yǎng)常用的六種發(fā)酵培養(yǎng)基進行了篩選，確定了基礎培養(yǎng)基，在此基礎上對碳氮源和無機

3、鹽進行了優(yōu)化，通過正交試驗確定了菌株769的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：黃豆豆粉2.0％，玉米粉1.50％，蔗糖1.0％，牛肉膏0.60％，碳酸鈣0.30％，硫酸銨0.50％，氯化鈉0.30％，硫酸鎂0.10％，磷酸二氫鉀0.02％，硫酸亞鐵0，01％。通過對最佳發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH值、接種量、搖瓶裝液量、搖床轉速等發(fā)酵條件進行正交試驗設計，確定搖瓶最佳發(fā)酵條件組合為：種子液菌齡28h，接種量4％，發(fā)酵時間72h，培養(yǎng)基初始pH6.72，培養(yǎng)基

4、裝量70ml/250 ml三角瓶，發(fā)酵溫度28℃，搖床轉速180rmin-1。最佳發(fā)酵條件的抑菌率達到87.75％，比初篩結果高出20％。 通過分析菌株769發(fā)酵液抑菌譜，發(fā)現發(fā)酵液對抑制植物病原菌具有廣譜性，對稻瘟病菌、番茄炭疽、構巢曲霉、番茄葉霉、番茄灰霉、玉米穗腐、小麥赤霉病原菌等有不同的抑制作用。 對769菌株發(fā)酵液的酸堿穩(wěn)定性研究表明，發(fā)酵液在酸堿環(huán)境中穩(wěn)定性好，只有在強酸和強堿環(huán)境中活性有所下降；熱穩(wěn)定性研究

5、表明，在100℃的環(huán)境中隨著時間的延長抑菌活性不斷下降，說明它的熱穩(wěn)定性在高溫下不是很好，但在其它溫度下其活性基本沒有改變。 通過測定發(fā)酵液對水稻幼苗主要防御酶活性結果顯示，原液、稀釋10倍、稀釋20倍的發(fā)酵液處理水稻秧苗，以發(fā)酵液原液的作用效果最為顯著，處理后水稻體內各種防御酶比對照均有明顯變化，使水稻獲得系統(tǒng)抗病性。769菌株發(fā)酵液處理水稻葉片可抑制過氧化氫酶(CAT)的活性，提高過氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL