激素性股骨頭壞死模型的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性評(píng)估.pdf

1、研究背景：股骨頭壞死是骨科常見的疾病。臨床上常見的股骨頭壞死的原因主要分為：創(chuàng)傷性和非創(chuàng)傷性股骨頭壞死。非創(chuàng)傷性股骨頭壞死的常見原因有使用激素、酗酒、血紅蛋白病、減壓病等，目前，激素性股骨頭壞死占非創(chuàng)傷性股骨頭壞死的首位。在臨床實(shí)踐中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白塞病、腎病綜合征、妊娠并發(fā)癥等疾病在治療中應(yīng)用激素，他們共同的特點(diǎn)是患者有不同程度的血管炎表現(xiàn)，這類患者在使用激素治療后容易產(chǎn)生股骨頭壞死。目前，部分骨科醫(yī)師嘗試使用患者自體骨髓間充質(zhì)干

2、細(xì)胞治療股骨頭壞死，主要是將多能的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，其治療的基礎(chǔ)是生物學(xué)特性正常的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。而以往的實(shí)驗(yàn)側(cè)重于研究股骨頭壞死模型的影像學(xué)表現(xiàn)、病理變化及血液的變化，而對于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)的研究較少且不全面，患者自體干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其細(xì)胞外基質(zhì)的成分及比例是否發(fā)生改變尚不明確，其自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是否適合用于治療股骨頭壞死還不明確。
　　方法：(1)利用牛血清和激素建立股骨頭壞死模型，

3、將20只250g-280g健康SD大鼠隨即分為實(shí)驗(yàn)組、對照組。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物腹腔注射牛血清(10ml/Kg)2次，間隔1周，于最后一次血清注射兩周后連續(xù)3d肌肉注射甲基強(qiáng)的松龍(40ml/Kg)；對照組動(dòng)物腹腔注射0.9％氯化鈉注射液(10ml/Kg)兩次，間隔1周，于最后一次注射2周后連續(xù)3d肌肉注射0.9％氯化鈉注射液(40ml/Kg)。(2)于最后一次肌肉注射2周后，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物拉頸處死，取出股骨頭，固定、石蠟包埋、切片行蘇木精.伊紅染

4、色，于光鏡下觀察骨結(jié)構(gòu)、細(xì)胞核變化。(3)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的檢測：①檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖率。②檢測的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨、成脂分化能力。
　　結(jié)果：(1)與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組軟骨下區(qū)幾乎為脂肪組織所代替，骨小梁稀疏，排列紊亂，脂肪細(xì)胞明顯增多，大量脂肪細(xì)胞堆積，體積增大；部分標(biāo)本可見骨小梁開始萎縮、變細(xì)。(2)細(xì)胞增值率檢測顯示，兩組在第7天時(shí)吸光度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；行成骨定向誘導(dǎo)后，ALP染色結(jié)果顯示，具有成骨細(xì)胞特