BMP2轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)羊股骨頭壞死.pdf

1、研究目的:評(píng)價(jià)Adv-hBMP-2基因轉(zhuǎn)染的BMSCs與TCP(磷酸三鈣)復(fù)合的組織工程化骨對(duì)羊股骨頭無(wú)菌性壞死的修復(fù)效果.材料與方法:1.掃描電鏡觀察TCP(磷酸三鈣)與羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)合情況:抽取羊骨髓行BMSCs培養(yǎng),取第2代BMSCs4皿與TCP材料復(fù)合,然后行掃描電鏡觀察.2.ELISA定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中BMP-2濃度:抽取羊骨髓行BMSCs培養(yǎng),分為3組:Ⅰ Adv-hBMP-2轉(zhuǎn)染細(xì)胞組;Ⅱ Adv-βgal轉(zhuǎn)染

2、細(xì)胞組;Ⅲ未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組.分別在第1,4,7和10天定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中BMP-2濃度.3.建立股骨頭無(wú)菌性壞死動(dòng)物模型:結(jié)扎羊的雙側(cè)旋股內(nèi)、外側(cè)動(dòng)脈,然后鉆孔將液氮灌入股骨頭.術(shù)后3周行大體形態(tài)、X線和組織學(xué)檢查.評(píng)價(jià)骨頭壞死情況.4.分組與治療:未治療組3只共6側(cè),BMP-2治療組14側(cè)(右側(cè))和β-gal治療組14側(cè)(左側(cè)).造模手術(shù)后3周植入或不植入細(xì)胞與TCP的復(fù)合物,手術(shù)后的不同時(shí)間進(jìn)行大體形態(tài)、X線、組織學(xué)檢查(脫鈣切片和

3、四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記)和生物力學(xué)測(cè)定.5.ELISA定量檢測(cè)組織工程化人工骨內(nèi)BMP-2濃度:9只羊分為2組:Ⅰ BMP-2治療組(右側(cè));Ⅱ βgal治療組(左側(cè)).先建立股骨頭壞死動(dòng)物模型,在3周后植入BMP-2基因修飾的組織工程化人工骨,在植入后的第1,2和第3周分批處死動(dòng)物將標(biāo)本取出,并定量檢測(cè)其內(nèi)BMP-2濃度.結(jié)論:BMSCs在轉(zhuǎn)染BMP-2基因后可以持續(xù)、有效的表達(dá)BMP-2,并有較強(qiáng)的誘導(dǎo)成骨能力.TCP在BMP-2基因給藥中