同種異體骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療兔股骨頭壞死的實驗研究.pdf

1、目的:研究同種異體骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)移植治療兔股骨頭壞死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)中供體細胞在宿主體內(nèi)的存活、分布及轉(zhuǎn)歸情況。
　　 方法:采用密度梯度離心法行BMSCs分離培養(yǎng)并傳代,取第3代細胞行1,1'-雙十八烷-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青-高氯酸鹽(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocy

2、anine perchlorate,DiI)熒光標記。通過股骨頭內(nèi)局部注射液氮制作股骨頭壞死動物模型。將48只雌性新西蘭大白兔隨機分成3組,A組16只為單純造模組,B組造模后注射自體DiI熒光標記BMSCs懸液,C組造模后注射雄兔異體DiI熒光標記BMSCs。術(shù)后2、4、6、8周各組分別處死4只動物,行雙側(cè)股骨頭X線觀察,取股骨頭標本行HE染色及Masson染色,測定新生骨小梁在股骨頭所占的體積百分比。取心臟、肺、肝、脾、腎組織及股骨頭

3、標本組織,采用熒光顯微鏡觀察各組織中DiI熒光細胞的表達,采用PCR檢測各組織中SRY基因的表達,以實時熒光定量PCR監(jiān)測供體細胞在體內(nèi)的數(shù)量變化。運用原位雜交技術(shù)對股骨頭標本內(nèi)的SRY基因進行檢測。
　　 結(jié)果:
　　 1.經(jīng)DiI熒光染劑標記后細胞形狀及生長曲線與未標記細胞基本一致。
　　 2.A組動物在術(shù)后3d時,股骨頭出現(xiàn)壞死;4w時出現(xiàn)修復(fù)反應(yīng),X線可見囊性變;6w時軟骨下骨硬化,出現(xiàn)新月征。
　

4、　 3.各時間點B、C組新生骨小梁占股骨頭體積百分比均高于A組,比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01),B、C組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 4.術(shù)后各時間點B、C組心臟、肺、肝、脾、腎組織均未見DiI熒光標記細胞。PCR結(jié)果顯示,C組各時間點心臟、肺、肝、脾、腎組織中均未檢測到SRY基因;C組各時間點股骨頭標本上可見SRY基因的表達,且隨時間逐漸減少,A、B組未見。
　　 5.C組原位雜交顯示DAB

5、染色陽性細胞在植入?yún)^(qū)存活,隨時間推移逐漸減少,靠近股骨頸區(qū)域的陽性細胞主要集中在壞死骨表面,股骨頭軟骨下區(qū)域陽性細胞主要集中于新骨骨陷凹內(nèi)。
　　 結(jié)論:
　　 1.液氮局部注射成功制作出兔股骨頭壞死模型,并可有效控制股骨頭壞死的位置及大小,為相關(guān)研究提供可靠的動物模型。
　　 2.在無免疫抑制的情況下,同種異體BMSCs和自體BMSCs移植對實驗兔股骨頭缺血性壞死的治療效果相似,均成功修復(fù)股骨頭壞死,兩者在病理