新生大鼠顱骨縫體外牽張早期NO和NOS的作用初探.pdf

1、第一部分新生大鼠顱骨縫體外牽張模型的建立 目的:建立新生SD大鼠顱頂骨骨縫器官培養(yǎng)模型，探討建立顱骨縫體外牽張模型的意義和可行性。 方法:取一周齡SD大鼠顱頂骨正中矢狀縫組織塊(骨縫位于組織塊中央)，大小8×10mm2，進行器官培養(yǎng)。培養(yǎng)基選用無酚紅高糖型DMEM(DulbeccosModifiedEagleMedium；GRH，56436，USA)，其中添加10﹪胎牛血清(FBS，GibcoBRL)，青霉素(100U/

2、L)，鏈霉素(100U/L)。對照組和實驗組的顱頂骨均安裝螺旋彈簧，彈簧選用直徑為0.01英寸的不銹鋼絲(Elgiloy0.01in，semiresilent；RockyMountain，Denver，CO，USAREFE00273)彎制(包括水平支持部分和垂直置入部分)。實驗組施加0.2克(0.00196N)張力，對照組將彈簧固定不施力，兩組分別于0、1、6、24、48h收獲標本。對實驗組和對照組標本進行常規(guī)HE染色，做組織形態(tài)學觀察

3、。 結論外源性張力有擴寬骨縫的作用，骨縫器官可在體外培養(yǎng)中成功存活并繼續(xù)生長、發(fā)育。 第二部分機械張力對新生大鼠顱骨縫組織生成一氧化氮的調(diào)節(jié)作用 目的:檢測機械張力作用下，新生SD大鼠顱頂骨骨縫組織生成一氧化氮(nitricoxide，NO)在早期不同時段的動態(tài)表達變化；探討NO在張應力調(diào)節(jié)骨縫生長早期的作用。 方法:分別取1h、6h、24h、48h實驗組和對照組器官培養(yǎng)的培養(yǎng)液，用NO試劑盒(南京聚力生物

4、醫(yī)學工程研究所提供)，根據(jù)硝酸還原酶法，通過分光光度計測出樣品管和標準管的消光值，根據(jù)其比例用公式：NO(μmol/l)=(樣品管消光值/標準管消光值)×100μmol/l計算出每個樣品管中的NO含量。 :結論體外培養(yǎng)的新生大鼠顱骨縫在牽張力作用下，NO表達顯著增加。 第三部分機械張力作用下新生大鼠顱骨縫組織中一氧化氮合酶三種同形異構體的表達 目的:觀察體外培養(yǎng)的新生SD大鼠顱頂骨骨縫在牽張力作用下，一氧化氮合酶(N

5、itricOxideSynthase，NOS)三種同形異構體(eNOS，nNOS，iNOS)的表達及其分布；探討一氧化氮(nitricoxide，NO)在機械應力調(diào)節(jié)骨縫組織改建過程中所起的作用。 方法:取一周齡SD大鼠顱頂骨正中矢狀縫組織塊(骨縫位于組織塊中央)，大小8×10mm2，進行器官培養(yǎng)，培養(yǎng)基選用無酚紅高糖型DMEM(DulbeccosModifiedEagleMedium：GRH，56436，USA)，其中添加10

6、﹪胎牛血清(FBS，GibcoBRL)，青霉素(100U/L)，鏈霉素(100U/L)。對照組和實驗組的顱頂骨均安裝螺旋彈簧，彈簧選用直徑為0.01英寸的不銹鋼絲(Elgiloy0.01in，semiresilent；RockyMountain，Denver，CO，USAREFE00273)彎制(包括水平支持部分和垂直置入部分)。實驗組施加0.2g(0.00196N)張力，對照組將彈簧固定不施力，兩組分別于0、1、6、24、48h收獲標