ROS參與牽張應(yīng)變誘導(dǎo)人牙周膜細(xì)胞早期凋亡.pdf

1、目的：:無論是牙周疾患、咬合創(chuàng)傷,亦或是義齒修復(fù)和正畸治療等皆有可能導(dǎo)致牙齒的松動(dòng)脫落,進(jìn)而引起牙槽骨吸收萎縮等嚴(yán)重后果.此過程中會(huì)出現(xiàn)牙周膜損傷和牙槽骨改建,其中必然伴隨相關(guān)細(xì)胞的死亡.然而牙周膜細(xì)胞死亡是如何進(jìn)行的,目前研究寥寥,基于以上情況即提出本實(shí)驗(yàn)研究的目的：探討牽張應(yīng)力與牙周膜細(xì)胞凋亡問聯(lián)系,以及引起凋亡的相關(guān)機(jī)理. 意義:試圖探討牙齒喪失時(shí)相關(guān)細(xì)胞的死亡機(jī)制,以期對(duì)口腔生理學(xué)和病理學(xué)的基礎(chǔ)研究提供一定的理論支持.從

2、而希望能夠?yàn)榭谇恍迯?fù)學(xué)和正畸學(xué)臨床提供一定的設(shè)計(jì)和診治依據(jù). 方法：通過原代和傳代培養(yǎng)獲得穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)用人牙周膜細(xì)胞,然后利用動(dòng)態(tài)機(jī)械應(yīng)變細(xì)胞加載裝置對(duì)1﹪、10﹪和20﹪應(yīng)變組的人牙周膜細(xì)胞分別進(jìn)行30min、1h、6h和12h的動(dòng)態(tài)牽張加載,最后通過流式細(xì)胞儀和激光掃描共聚焦顯微鏡對(duì)經(jīng)過Annexin V、PI和2'-7'-Dichlorofluorescin diacetate染色的細(xì)胞進(jìn)行早期凋亡和ROS(活性氧)水平進(jìn)行

3、檢測. 結(jié)果： 1、動(dòng)態(tài)機(jī)械應(yīng)變細(xì)胞加載裝置有輸出應(yīng)變范圍大、精度高、操作方便、顯示直觀可穩(wěn)定地連續(xù)的對(duì)人牙周膜細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)態(tài)加載;2、三維有限元分析顯示1﹪、5﹪和10﹪應(yīng)變組中,在膜的邊緣區(qū)和中央?yún)^(qū)之間的環(huán)形區(qū)的應(yīng)力值要低于前兩個(gè)區(qū),并且其應(yīng)力值顏色無突變性;20﹪和25﹪應(yīng)變組,應(yīng)力分布較均勻. 3、人牙周膜細(xì)胞在4-8代的性狀穩(wěn)定,適宜于進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn),且可明確細(xì)胞來源于外胚間充質(zhì); 4、流式細(xì)胞儀的

4、Annexin V-FITC檢測發(fā)現(xiàn)在6h時(shí)凋亡率達(dá)到峰值,然后在12h降至對(duì)照組水平;動(dòng)態(tài)加載牽張應(yīng)變6h時(shí),1﹪、10﹪和20﹪各組細(xì)胞內(nèi)ROS水平基本達(dá)到本組的峰值.當(dāng)動(dòng)態(tài)加載12h時(shí),1﹪組的ROS水平略有上升,而10﹪和20﹪組的ROS水平逐步下降; 5、激光掃描共聚焦顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)對(duì)照組和20﹪牽張應(yīng)變、6h組皆有早期凋亡表達(dá),但20﹪應(yīng)變組明顯增多.另外ROS的檢測顯示對(duì)照組與動(dòng)態(tài)加載組皆有綠色熒光的ROS的表達(dá),