ROS參與牽張應變誘導人牙周膜細胞早期凋亡.pdf

1、目的：:無論是牙周疾患、咬合創(chuàng)傷,亦或是義齒修復和正畸治療等皆有可能導致牙齒的松動脫落,進而引起牙槽骨吸收萎縮等嚴重后果.此過程中會出現(xiàn)牙周膜損傷和牙槽骨改建,其中必然伴隨相關(guān)細胞的死亡.然而牙周膜細胞死亡是如何進行的,目前研究寥寥,基于以上情況即提出本實驗研究的目的：探討牽張應力與牙周膜細胞凋亡問聯(lián)系,以及引起凋亡的相關(guān)機理. 意義:試圖探討牙齒喪失時相關(guān)細胞的死亡機制,以期對口腔生理學和病理學的基礎(chǔ)研究提供一定的理論支持.從

2、而希望能夠為口腔修復學和正畸學臨床提供一定的設計和診治依據(jù). 方法：通過原代和傳代培養(yǎng)獲得穩(wěn)定的實驗用人牙周膜細胞,然后利用動態(tài)機械應變細胞加載裝置對1﹪、10﹪和20﹪應變組的人牙周膜細胞分別進行30min、1h、6h和12h的動態(tài)牽張加載,最后通過流式細胞儀和激光掃描共聚焦顯微鏡對經(jīng)過Annexin V、PI和2'-7'-Dichlorofluorescin diacetate染色的細胞進行早期凋亡和ROS(活性氧)水平進行

3、檢測. 結(jié)果： 1、動態(tài)機械應變細胞加載裝置有輸出應變范圍大、精度高、操作方便、顯示直觀可穩(wěn)定地連續(xù)的對人牙周膜細胞進行動態(tài)加載;2、三維有限元分析顯示1﹪、5﹪和10﹪應變組中,在膜的邊緣區(qū)和中央?yún)^(qū)之間的環(huán)形區(qū)的應力值要低于前兩個區(qū),并且其應力值顏色無突變性;20﹪和25﹪應變組,應力分布較均勻. 3、人牙周膜細胞在4-8代的性狀穩(wěn)定,適宜于進行細胞實驗,且可明確細胞來源于外胚間充質(zhì); 4、流式細胞儀的

4、Annexin V-FITC檢測發(fā)現(xiàn)在6h時凋亡率達到峰值,然后在12h降至對照組水平;動態(tài)加載牽張應變6h時,1﹪、10﹪和20﹪各組細胞內(nèi)ROS水平基本達到本組的峰值.當動態(tài)加載12h時,1﹪組的ROS水平略有上升,而10﹪和20﹪組的ROS水平逐步下降; 5、激光掃描共聚焦顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)對照組和20﹪牽張應變、6h組皆有早期凋亡表達,但20﹪應變組明顯增多.另外ROS的檢測顯示對照組與動態(tài)加載組皆有綠色熒光的ROS的表達,