子宮內(nèi)膜異位癥患者生命質(zhì)量及microRNA表達(dá)譜的初步研究.pdf

1、隨著傳統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)模式向生物-心理-社會(huì)醫(yī)學(xué)模式的轉(zhuǎn)變，單純的疼痛和不孕等癥狀學(xué)評(píng)價(jià)已不能全面反應(yīng)子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EMS)患者身心健康的重要方面，健康相關(guān)生命質(zhì)量(Health-related quality of life，HRQoL)開(kāi)始被越來(lái)越多的研究者所關(guān)注。然而，目前尚缺乏對(duì)EMS患者HRQoL的系統(tǒng)評(píng)價(jià)。
　　 子宮內(nèi)膜異位癥健康相關(guān)生命質(zhì)量量表(Endometriosis Health P

2、rofile-30，EHP-30)是目前評(píng)價(jià)EMS患者生命質(zhì)量最可靠的量表，已被多個(gè)國(guó)家所采用，并被美國(guó)生育學(xué)會(huì)和歐洲胚胎與生殖學(xué)會(huì)推薦用于EMS患者生命質(zhì)量的評(píng)價(jià)。然而，其是否適用與中國(guó)EMS女性仍未知？同時(shí)，作為HRQoL的重要組成部分，性生活質(zhì)量在中國(guó)EMS患者中長(zhǎng)期被大家所忽視。
　　 microRNA，是一類長(zhǎng)約22個(gè)堿基的非編碼小RNA。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)microRNA參與EMS發(fā)病的多個(gè)環(huán)節(jié)，包括缺氧、炎癥反應(yīng)、組織

3、修復(fù)、凋亡、細(xì)胞外間質(zhì)重塑、新生血管生成及惡變等。另一方面，microRNA能夠穩(wěn)定存在于血漿或血清中，具備疾病分子生物標(biāo)記物的某些優(yōu)點(diǎn)，已在多種腫瘤和非腫瘤疾病的診斷和預(yù)后中顯示了潛在的價(jià)值。
　　 本論文主要包括兩大專題六個(gè)部分，第一專題主要是關(guān)于EMS患者健康相關(guān)生命質(zhì)量和性生活質(zhì)量的相關(guān)研究;第二專題關(guān)于EMS在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜及血漿microRNA表達(dá)譜研究，并結(jié)合文本挖掘，探索EMS發(fā)病機(jī)制。
　　 第一部分

4、子宮內(nèi)膜異位癥患者健康相關(guān)生命質(zhì)量和性生活質(zhì)量的研究
　　 目的：
　　 i.系統(tǒng)評(píng)價(jià)EMS和相關(guān)治療對(duì)女性HRQoL的影響。
　　 ii.翻譯并評(píng)價(jià)簡(jiǎn)體中文版EHP-30在中國(guó)EMS人群HRQoL評(píng)價(jià)中的信度和效度。
　　 iii.橫斷面調(diào)查EMS患者女性性功能障礙(FSD)的患病率及危險(xiǎn)因素。
　　 方法：
　　 i.檢索截至2012年5月發(fā)表在PubMed，Embase，PsycoI

5、NFO，CINAHL和theCochrane Clinical Trials數(shù)據(jù)庫(kù)的所有關(guān)于EMS患者HRQoL的英文文獻(xiàn)。
　　 ii.由英國(guó)PharmaQuest公司參照國(guó)際指南完成簡(jiǎn)體中文版EHP-30的翻譯工作;使用中文版EHP-30和SF-36，橫斷面調(diào)查2012年2月至2012年8月就診于北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科的336名EMS患者;采用描述性分析、因子分析、相關(guān)分析、信度分析及效度分析等心理測(cè)量學(xué)統(tǒng)計(jì)方法評(píng)價(jià)量表的信度和

6、效度。
　　 iii.橫斷面調(diào)查2011年7月至2012年4月在北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科住院，擬診EMS而行腹腔鏡手術(shù)的患者。術(shù)前收集患者的一般資料及疾病史，同時(shí)采用中文版女性性功能量表評(píng)價(jià)患者的性功能。
　　 結(jié)果：
　　 i.共檢索出591篇文獻(xiàn)，其中39篇文獻(xiàn)符合納入標(biāo)準(zhǔn)，包括9篇觀察性研究和30篇干預(yù)性研究。薈萃分析結(jié)果顯示EMS降低患者的HRQoL，其中疼痛是影響EMS患者HRQoL的主要因素，而疾病程度、病

7、程和不孕對(duì)HRQoL的影響結(jié)論不一;另一方面，藥物或手術(shù)治療可以部分改善患者的HRQoL，而不同藥物在改善HRQoL的優(yōu)勢(shì)目前尚無(wú)定論。
　　 ii.因子分析顯示中文版EHP-30具有較好的結(jié)構(gòu)效度，提取的5個(gè)公因子與量表的理論結(jié)構(gòu)假設(shè)基本一致，累積貢獻(xiàn)率達(dá)79.51％;相關(guān)性分析顯示EHP-30和SF-36相關(guān)性顯著，提示中文版EHP-30具有較理想的校標(biāo)效度;同時(shí)，中文版EHP-30具有很好的內(nèi)部一致性，Cronbach's

8、α系數(shù)介于0.80-0.97之間。數(shù)據(jù)完成情況均超過(guò)97.67％，除自我認(rèn)知(19.64％)、與孩子的關(guān)系(26.67％)和對(duì)醫(yī)療職業(yè)的感受(15.19％)3個(gè)維度外，未觀察到天花板或地板效應(yīng)?？刂坪蜔o(wú)力感及懷孕是影響子宮內(nèi)膜異位癥患者HRQoL的兩個(gè)主要維度。
　　 iii.總計(jì)納入111名經(jīng)病理證實(shí)的內(nèi)異癥患者，其FSD的患病率為73％。單因素分析顯示盆腔疼痛的強(qiáng)度、深部浸潤(rùn)型子宮內(nèi)膜異位癥和rAFS分期和FSD相關(guān)，多因素

9、分析顯示中重度盆腔痛[校正優(yōu)勢(shì)比(AOR):3.4;95％CI:1.3-8.8]及rAFSⅢ-Ⅳ期[AOR:4.4;95％CI:1.3-15.5]是內(nèi)異癥患者FSD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　 結(jié)論：
　　 i.EMS損害患者的生命質(zhì)量，應(yīng)重視EMS相關(guān)生命質(zhì)量研究。
　　 ii.簡(jiǎn)體中文版EHP-30有較好的效度、信度和接受度，適用于中國(guó)大陸EMS女性健康生命質(zhì)量評(píng)估，但量表的復(fù)測(cè)信度及區(qū)分效度則需要進(jìn)一步研究。

10、r>　　 iii.EMS降低患者的性功能，尤其對(duì)于合并中重度盆腔痛及rAFSⅢ-Ⅳ期的患者。
　　 第二部分子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜和血漿microRNA表達(dá)譜研究
　　 目的：
　　 i.基于文本挖掘探索EMS相關(guān)基因及microRNA在EMS發(fā)病中的作用。
　　 ii.基于新一代測(cè)序技術(shù)解析EMS在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜microRNA表達(dá)譜。
　　 iii.探索血漿microRNA在EM

11、S中的診斷價(jià)值。
　　 方法：
　　 i.利用PubMed公共數(shù)據(jù)庫(kù)文本挖掘EMS相關(guān)基因和microRNA，并進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)、生物學(xué)通路、Gene Ontology、 microRNA靶基因預(yù)測(cè)和功能注釋聚類等生物信息學(xué)分析。
　　 ii.納入3例卵巢子宮內(nèi)膜異位癥患者，術(shù)中收集在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜。采用割膠純化的方法回收高質(zhì)量的microRNA條帶，然后于Illumina GenomeAnalyze

12、rⅡx行新一代測(cè)序分析，結(jié)合生物信息學(xué)分析篩查在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜差異表達(dá)的microRNAs。
　　 iii.納入2012年1月至2012年5月于北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科行腹腔鏡治療的EMS患者23例，非EMS患者23例，術(shù)前收集患者的外周血2ml，并分離血漿，提取總RNA。首先采用芯片法篩選3例EMS患者和3例非EMS患者血漿差異表達(dá)的microRNA，然后基于文獻(xiàn)報(bào)道選取其中6個(gè)microRNA行qRT-PCR驗(yàn)證。
　　

13、 結(jié)果：
　　 i.文本挖掘發(fā)現(xiàn)183個(gè)EMS相關(guān)基因和54個(gè)microRNA，蛋白-蛋白相關(guān)作用網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)VEGFA、RELA、MMP9、PCNA、PTGS2、IL10、TP53、CD44、 MMP1、TNF、IL6、MDM2、NGF、FOXO1、PGR、EGF、IL1B、PTEN和PIK3CA等關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)基因，功能注釋聚類分析顯示EMS相關(guān)基因主要涉及凋亡、細(xì)胞增殖和趨化作用等相關(guān)通路。
　　 ii.所有6個(gè)樣品建庫(kù)

14、成功，Illumina Genome AnalyzerⅡx深度測(cè)序平均讀取12 M/樣品。我們發(fā)現(xiàn)15個(gè)高表達(dá)豐度的microRNAs在卵巢EMS患者在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜差異表達(dá)。
　　 iii.芯片法發(fā)現(xiàn)27個(gè)microRNA在EMS和非EMS患者血漿中存在差異表達(dá)。對(duì)miR-15b-5p,miR-17-5p,miR-20a,miR-21,miR-22和miR-26a的qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)血漿miR-17-5p，miR-20a

15、和miR-22在EMS患者中表達(dá)明顯降低(P=0.011，0.0020和0.0002)，其ROC曲線下面積分別為0.74，0.79和0.85。
　　 結(jié)論：
　　 i.VEGFA、RELA(NFκB)、MMP9、PCNA等關(guān)鍵基因，以及凋亡、細(xì)胞增殖和趨化作用等相關(guān)通路在EMS的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用。
　　 ii.新一代測(cè)序技術(shù)為microRNA表達(dá)譜提供了良好的平臺(tái)，卵巢EMS患者在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜存在m