卵巢癌CD47表達(dá)水平及靶向治療的體外研究.pdf

1、目的:①明確CD47在卵巢癌中的表達(dá)情況，分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，為CD47單克隆抗體應(yīng)用于卵巢癌的靶向治療提供理論依據(jù)。②探討CD47單克隆抗體對巨噬細(xì)胞吞噬卵巢癌細(xì)胞的作用，為CD47單克隆抗體治療卵巢癌提供實驗依據(jù)。③初步研究ALDH+/ALDH-卵巢癌細(xì)胞CD47的表達(dá)情況，為后續(xù)針對卵巢癌干細(xì)胞的研究提供實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:①應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD47在人卵巢癌細(xì)胞系SKOV-3及正常卵巢組織細(xì)胞和卵巢癌組織細(xì)

2、胞中的表達(dá)情況，分析其與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，明確其在卵巢癌的臨床意義。②通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)、CD14免疫表型、雞紅細(xì)胞吞噬實驗分析小鼠巨噬細(xì)胞、人外周血巨噬細(xì)胞和人臍血巨噬細(xì)胞三種巨噬細(xì)胞活性的情況。③應(yīng)用細(xì)胞功能學(xué)實驗通過免疫熒光顯微鏡觀察CD47單克隆抗體對巨噬細(xì)胞吞噬卵巢癌細(xì)胞和SKOV-3細(xì)胞的作用。④應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測ALDH+卵巢癌干細(xì)胞的比例，并分析卵巢癌ALDH+/ALDH-細(xì)胞CD47的表達(dá)情況。
　　

3、結(jié)果:①CD47表達(dá)水平于人卵巢癌細(xì)胞系SKOV-3（CD47平均熒光強(qiáng)度值47.44±4.55）和卵巢癌細(xì)胞中（CD47平均熒光強(qiáng)度值17.00±10.93）均明顯高于正常卵巢組織細(xì)胞（CD47平均熒光強(qiáng)度值3.03±1.14），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);并且其表達(dá)水平與卵巢癌患者年齡、病理類型無明顯聯(lián)系，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，而與疾病的臨床分期、病理分化程度具有明顯聯(lián)系，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。②三

4、種來源的巨噬細(xì)胞中人臍血巨噬細(xì)胞較小鼠巨噬細(xì)胞及人外周血巨噬細(xì)胞相比，其培養(yǎng)條件復(fù)雜，變量因素較多，并且吞噬功能明顯對比小鼠巨噬細(xì)胞及人外周血巨噬細(xì)胞較弱。因此后續(xù)的細(xì)胞功能實驗應(yīng)用小鼠巨噬細(xì)胞及人外周血巨噬細(xì)胞進(jìn)行體外實驗。③巨噬細(xì)胞與卵巢癌腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)的體外細(xì)胞功能學(xué)實驗表明CD47單克隆抗體可明顯促進(jìn)巨噬細(xì)胞對卵巢癌腫瘤細(xì)胞的吞噬作用，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而同抗體本身的作用及HLA機(jī)制介導(dǎo)的免疫作用無明顯關(guān)系(P

5、＞0.05);隨著應(yīng)用CD47單克隆抗體濃度的改變，其吞噬指數(shù)呈明顯的濃度依賴性，隨抗體濃度的增加，吞噬作用加強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，當(dāng)抗體濃度于10μg/mL時表現(xiàn)為吞噬效率最大，吞噬指數(shù)0.35（±0.09），這可能與抗體濃度達(dá)到飽和的狀態(tài)有關(guān)。④流式細(xì)胞術(shù)分析的7例卵巢癌組織細(xì)胞標(biāo)本中ALDH+卵巢癌干細(xì)胞的比率很少（1.65±1.27）％，ALDH+細(xì)胞的CD47表達(dá)水平（19.85±3.80）明顯高于ALDH-