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文檔簡介
1、目的：為研究電壓門控性鈉離子通道β1亞基在神經(jīng)病理性疼痛中的作用，制備β1亞基基因（SCN1b）條件性過表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠。 方法：將電壓門控性鈉離子通道β1亞基的編碼序列片段經(jīng)PCR擴(kuò)增后，插入經(jīng)EcoRⅠ，BamHⅠ 酶切后的表達(dá)載體pCMV-loxp- lacZ-loxp-IRES-eGFP中，得到新的表達(dá)載體pCMV-loxp-lacZ-loxp- SCN1b-IRES-eGFP，NsiⅠ酶切線性化后，應(yīng)用顯微注射法將構(gòu)建好
2、的目的片段注入小鼠的受精卵核中，移植受精卵入假孕母鼠輸卵管，假孕母鼠后代小鼠經(jīng)PCR檢測陽性的小鼠，即為原代小鼠，通過原代小鼠的后代小鼠X-gal染色鑒定目的基因在原代小鼠的整合部位。 結(jié)果：假孕母鼠后代13只仔鼠，PCR檢測出3只陽性，得到原代小鼠，通過原代小鼠的后代小鼠X-gal染色確定只有一只原代小鼠背根神經(jīng)節(jié)（DRG）細(xì)胞染色陽性。 結(jié)論：成功制備在DRG條件性過表達(dá)SCN1b的轉(zhuǎn)基因小鼠模型，為深入研究電壓門控
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