采用鈉離子熒光探針檢測(cè)鈉離子通道類毒素細(xì)胞毒性的方法研究.pdf

1、[目的]
　　 隨著人們對(duì)鈉離子通道類毒素危害的深入了解，人們希望能找到某種敏感、快速的檢測(cè)方法，以減少對(duì)人類的危害以及經(jīng)濟(jì)上的損失。其中雪卡毒素中毒是目前世界上報(bào)道最多的食源性生物毒素中毒性疾病之一。在本研究中，研究和建立Na+熒光探針檢測(cè)雪卡毒素的方法，為快速、敏感地檢測(cè)雪卡毒素提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)，將此方法應(yīng)用到麻痹性貝毒(Paralytic ShellfishPoisoning，PSP)和神經(jīng)性貝毒(Neurotox

2、ic Shellfish Poisoning，NSP)的檢測(cè)，建立一種適用于鈉離子通道類毒素的檢測(cè)方法。
　　 [方法]
　　 (1)本研究擬在現(xiàn)有的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，結(jié)合Na+/K+泵抑制劑烏本苷和鈉離子通道激活劑藜蘆定共同作用細(xì)胞，通過(guò)Na+熒光探針CoroNaTM Green標(biāo)記正常細(xì)胞和不同濃度梯度的毒素標(biāo)準(zhǔn)品處理的細(xì)胞，利用多功能全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)不同濃度梯度的毒素與熒光強(qiáng)度之間的關(guān)系，建立Na+熒

3、光探針?lè)ā?2)通過(guò)小鼠生物法、免疫試劑盒法、細(xì)胞毒性試驗(yàn)法、高效液相色譜一質(zhì)譜法以及Na+熒光探針?lè)z測(cè)同一批樣品，并比較結(jié)果。(3)將建立的Na+熒光探針?lè)z測(cè)PSP和NSP，并與ELISA法的檢測(cè)結(jié)果相比較。
　　 [結(jié)果]
　　 (1)建立了Na+熒光探針?lè)?，該法的最低檢出限為10pg/L，與高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法相當(dāng)，最佳毒素檢測(cè)范圍為10pg/L～105pg/L。同時(shí)，細(xì)胞處理時(shí)間比細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)CCK-8法