采用鈉離子熒光探針檢測鈉離子通道類毒素細胞毒性的方法研究.pdf

1、[目的]
　　 隨著人們對鈉離子通道類毒素危害的深入了解，人們希望能找到某種敏感、快速的檢測方法，以減少對人類的危害以及經(jīng)濟上的損失。其中雪卡毒素中毒是目前世界上報道最多的食源性生物毒素中毒性疾病之一。在本研究中，研究和建立Na+熒光探針檢測雪卡毒素的方法，為快速、敏感地檢測雪卡毒素提供科學的實驗依據(jù)。同時，將此方法應用到麻痹性貝毒(Paralytic ShellfishPoisoning，PSP)和神經(jīng)性貝毒(Neurotox

2、ic Shellfish Poisoning，NSP)的檢測，建立一種適用于鈉離子通道類毒素的檢測方法。
　　 [方法]
　　 (1)本研究擬在現(xiàn)有的細胞毒性實驗基礎(chǔ)上優(yōu)化實驗條件，結(jié)合Na+/K+泵抑制劑烏本苷和鈉離子通道激活劑藜蘆定共同作用細胞，通過Na+熒光探針CoroNaTM Green標記正常細胞和不同濃度梯度的毒素標準品處理的細胞，利用多功能全自動酶標儀檢測不同濃度梯度的毒素與熒光強度之間的關(guān)系，建立Na+熒

3、光探針法。(2)通過小鼠生物法、免疫試劑盒法、細胞毒性試驗法、高效液相色譜一質(zhì)譜法以及Na+熒光探針法檢測同一批樣品，并比較結(jié)果。(3)將建立的Na+熒光探針法檢測PSP和NSP，并與ELISA法的檢測結(jié)果相比較。
　　 [結(jié)果]
　　 (1)建立了Na+熒光探針法，該法的最低檢出限為10pg/L，與高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法相當，最佳毒素檢測范圍為10pg/L～105pg/L。同時，細胞處理時間比細胞毒性實驗CCK-8法