大鼠觸液核酸敏感離子通道3的分布及其在炎性痛條件下的表達(dá).pdf

1、目的：通過(guò)觀察大鼠觸液核(Cerebrospinal fluid-contacting nucleus，CSF-contacting nucleus)中酸敏感離子通道3(Acid-sensing ion channel3，ASIC3)的分布、炎性痛條件下的表達(dá)，以及給予ASIC3特異性抑制劑后對(duì)大鼠炎性痛行為的影響，以證明觸液核中不僅存在ASIC3且可以通過(guò)其參與炎性痛的信息傳遞或調(diào)節(jié)作用，為觸液核通過(guò)腦-腦脊液環(huán)路參與痛覺(jué)傳導(dǎo)與調(diào)控提

2、供新的分子物質(zhì)依據(jù)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)用成年雄性SD大鼠，分為完全弗氏佐劑致炎性痛組（CFA組）、生理鹽水對(duì)照組（Saline組）、ASIC3特異性抑制劑組(APETx2組)、抑制劑溶媒對(duì)照組(Vehicle組)和正常組(Normal組)。選擇von Frey纖維絲和熱輻射痛敏檢測(cè)儀，檢測(cè)機(jī)械縮足閡值(Mechanical withdrawal threshold，MWT)和熱縮足潛伏期(Thermal withdrawal lat

3、ency, TWL)，觀察各組大鼠行為學(xué)變化。大鼠在處死前48小時(shí)側(cè)腦室注射特異性觸液神經(jīng)元定位示蹤劑霍亂毒素亞單位B耦聯(lián)辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物（Cholera toxin B conjugated to horseradish peroxidase，CB-HRP）標(biāo)記觸液神經(jīng)元。采用免疫熒光化學(xué)雙重標(biāo)記技術(shù)與激光共聚焦顯微鏡技術(shù)相結(jié)合，定位、鑒別和計(jì)數(shù)ASIC3在正常大鼠觸液核的分布及在炎性痛條件下的表達(dá)。用Image-Pro Plus

4、圖像計(jì)數(shù)軟件比較CB-HRP陽(yáng)性、ASIC3陽(yáng)性和CB-HRP/ASIC3雙標(biāo)陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量的變化。在炎性痛第3天，側(cè)腦室注射ASIC3特異性抑制劑APETx2，觀察大鼠痛行為的變化。
　　結(jié)果：(1)正常大鼠觸液核內(nèi)有ASIC3陽(yáng)性標(biāo)記細(xì)胞分布，約占觸液核神經(jīng)元細(xì)胞總數(shù)的34.6％;(2)與術(shù)前和Saline組相比，炎性痛大鼠炎癥側(cè)后足術(shù)后第1天、3天和7天的MWT和TWL均明顯降低(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;術(shù)后第

5、3天、7天CB-HRP/ASIC3雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞占CB-HRP陽(yáng)性標(biāo)記細(xì)胞總數(shù)分別為52.7％、40.6％，與正常組比較明顯增加(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)與Vehicle組相比，術(shù)后第3天側(cè)腦室注射ASIC3特異性抑制劑APETx2，外周炎癥引起的機(jī)械性痛覺(jué)超敏和熱痛覺(jué)過(guò)敏明顯減輕(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：正常大鼠觸液核有ASIC3分布，在炎性痛條件下表達(dá)上調(diào)，給予抑制劑APETx2抑制觸液核內(nèi)