胰高血糖素對新生大鼠心肌細胞生長及脂代謝的影響.pdf

1、目的：糖尿病心肌病是糖尿病的嚴重并發(fā)癥之一。它是以心肌肥大增生、心肌纖維化、心肌細胞凋亡、心肌細胞功能下降、細胞水平鈣轉運缺陷和脂肪酸代謝異常等為特征的心肌病變?？蓪е滦牧λソ?、心律失常、心絞痛、心源性休克和猝死。其發(fā)病機制還不清楚。胰高血糖素是胰島α細胞分泌的一種多肽激素，其主要生理作用是促進糖原分解、抑制糖原合成和增強糖異生，使血糖升高。近年來對胰高血糖素也有了進一步的認識，強調了胰高血糖素在2型糖尿病發(fā)病機制中的地位。本研究擬證實

2、胰高血糖素對新生大鼠心肌細胞是否有非升糖促生長作用，是否可引起心肌脂代謝異常，并進一步探討高胰高血糖素血癥在糖尿病及其心肌病變中的作用，為闡明糖尿病及其并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的機制和研發(fā)新的治療策略尋找理論依據(jù)。
　　 方法：采用膠原酶消化法和差速貼壁法分離新生大鼠心肌細胞并做原代培養(yǎng)。常規(guī)培養(yǎng)心肌細胞72h后，更換為無血清的DMEM（Dulbecco modified Eagle medium）培養(yǎng)液。每5孔細胞為一組，共分7組，換培

3、養(yǎng)基的同時給藥：第一組為正常對照組，不給予藥物；第二組為給予濃度10-10mol/L胰高血糖素的高胰高血糖素組；第三組為給予25.5mmol/L葡萄糖的高糖組；第四組為給予10-7mol/L胰島素的高胰島素組；第五組為給予25.5mmol/L葡萄糖和10-10mol/L胰高血糖素的高糖高胰高血糖素組；第六組為給予25.5mmol/L葡萄糖和10-7mol/L胰島素的高糖高胰島素組；第七組在第六組基礎上加入10-10mol/L胰高血糖素的

4、高糖高胰島素高胰高血糖素組。給藥后每天在倒置相差顯微鏡下進行細胞形態(tài)學的觀察。給藥48 h后進行各項指標的測定。
　　 （1）倒置相差顯微鏡下觀察處理前后心肌細胞形態(tài)學變化，臺盼藍染色法計數(shù)處理后各組細胞數(shù)目。（2）末端脫氧核苷酸轉移酶（terminal deoxynucleotidyl transferas，TdT）介導的生物素?；撗跄蛭羧姿幔╠eoxyuridine triphosphate，dUTP）生物素原位缺口末端

5、標記法（TdT mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）檢測心肌細胞凋亡情況，并計算心肌細胞凋亡率。（3）紫外分光光度法檢測細胞內游離脂肪酸（free fatty acid，F(xiàn)FA）和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）含量；生化法檢測細胞培養(yǎng)上清液心肌酶[乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）和肌酸激酶

6、同工酶（MB isoenzyme of creatine kinase，CK-MB）]水平。
　　 結果：（1）新生大鼠心肌細胞原代培養(yǎng)成功。
　　 （2）分組給藥后各實驗組心肌細胞數(shù)目均較對照組增多，細胞計數(shù)：正常對照組8.0×105/ml，高胰高血糖素組9.0×105/ml，高糖組9.1×105/ml，高胰島素組8.8×105/ml，高糖加高胰高血糖素組9.7×105/ml，高糖高胰島素組9.0×105/ml，高糖高

7、胰島素高胰高血糖素組10.0×105/ml。
　　 （3）分組給藥后檢測心肌細胞凋亡情況，鏡下各組均可見棕褐色核細胞，但多少不一，高糖組心肌細胞凋亡率32.80±2.64％，凋亡細胞較正常對照組明顯增多（t=20.941，P=0.000），差異有統(tǒng)計學意義；高胰高血糖素組與正常對照組比較（t=1.796，P=0.110），差異無統(tǒng)計學意義；高胰島素組與正常對照組比較（t=0.460，P=0.658），差異無統(tǒng)計學意義；3個混合組

8、與正常對照組比較，差異也無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　 （4）高胰高血糖素組心肌細胞內FFA（t=26.422，P=0.000）、LPL（t=6.295，P=0.002）均較正常對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義；高糖組FFA（t=39.269，P=0.000）、LPL（t=13.591，P=0.000）均較正常對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義；高胰島素組FFA（t=4.615，P=0.002）、LPL（t=4.913，P=

9、0.001）均較正常對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義；高糖高胰高血糖素組FFA（t=8.415，P=0.001）、LPL（t=14.052，P=0.000）均較正常對照組也明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義；高糖高胰島素高胰高血糖素組LPL較正常對照組明顯升高（t=2.768，P=0.024），差異有統(tǒng)計學意義，兩組FFA比較（t=-1.948，P=0.087），差異無統(tǒng)計學意義；而高糖高胰島素組FFA（t=-0.146，P=0.887）、LP

10、L（t=0.948，P=0.371）與正常對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義。
　　 （5）細胞培養(yǎng)液LDH水平高胰高血糖素組（t=5.090，P=0.001）、高糖組（t=2.601，P=0.032）及高糖高胰高血糖素組（t=3.228，P=0.012）與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義；其余各實驗組與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義。
　　 CK、CK-MB水平各實驗組與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：