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文檔簡(jiǎn)介
1、目的: 1.體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞。 2.研究胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)對(duì)缺氧復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)條件下心肌細(xì)胞損傷的作用,進(jìn)一步驗(yàn)證GLP-1是否具有心臟保護(hù)功能。 3.為GLP-1相關(guān)藥物的臨床應(yīng)用的安全性和有效性提供理論依據(jù)。 方法: 1.體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞,通過(guò)顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察以及免疫組織化學(xué)方法鑒
2、定心肌細(xì)胞。 2.心肌細(xì)胞隨機(jī)分為三組:正常對(duì)照組(A組),單純?nèi)毖?復(fù)氧組(缺氧16h,復(fù)氧4h,B組),缺氧/復(fù)氧+GLP-1組(10nmol/L,C組)。 3.試劑盒測(cè)定各組培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性。 4.碘化丙錠(propidium iodide,PI)單染后,以流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率。 5.試劑盒檢測(cè)各組半胱天冬酶3(caspase
3、-3)的活性。 結(jié)果: 1.經(jīng)各項(xiàng)鑒定培養(yǎng)細(xì)胞為心肌細(xì)胞,且純度可達(dá)90%。 2.LDH活性:與A組比較,B組的LDH活性明顯升高(210.0±11.5 U/L vs101.4±6.5U/L,P<0.01),;與B組相比,C組的LDH活性降低(190.2±9.0 U/L vs 210.0±11.5 U/L,P<0.01),二者差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.細(xì)胞凋亡率:與A組比較,B組的細(xì)胞凋亡率顯著增高(8.
4、138±1.512vs0.575±0.167,P<0.01);與B組比較,C組細(xì)胞凋亡率顯著降低(2.688±0.589 vs 8.138±1.512,P<0.01),二者差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.caspase-3活性:與A組比較,B組caspase-3活性明顯升高(445155.1±56914.2 vs 199813.1±19695.5,P<0.01);與B組比較,C組caspase-3活性顯著降低(445155.1±569
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