川西獐牙菜及龍膽苦苷對膽汁淤積大鼠肝臟MRP2、BSEP表達的影響.pdf

1、研究背景和目的:
　　膽汁淤積是由膽汁生成和流動障礙所致肝臟疾病共同的臨床綜合征,也是直接導(dǎo)致肝細胞損傷、肝功能衰竭的主要因素。膽汁淤積的治療目前除梗阻引起的可以進行外科手術(shù)外,絕大多數(shù)膽汁淤積的臨床治療都缺乏行之有效的藥物。導(dǎo)致膽汁淤積的分子機制和保護機制十分復(fù)雜,現(xiàn)在主要認為與肝細胞膜膽汁酸轉(zhuǎn)運蛋白功能的改變密切相關(guān),肝細胞膜膽汁酸轉(zhuǎn)運蛋白異常表達導(dǎo)致膽汁酸排泌障礙,肝細胞內(nèi)有毒物質(zhì)(如膽汁酸鹽)的積聚,造成肝臟損傷。膽鹽輸出

2、泵(BSEP)和多耐藥相關(guān)蛋白2(MRP2)是肝細胞毛細膽管膜面最重要的兩種轉(zhuǎn)運蛋白。BSEP的作用是通過消耗ATP將肝細胞內(nèi)各種結(jié)合型膽鹽轉(zhuǎn)運到毛細膽管中,刺激膽鹽依賴性膽汁流的形成,是影響膽汁流最重要的因素;MRP2也消耗ATP跨膜主動轉(zhuǎn)運有機陰離子,包括結(jié)合型膽紅素、谷胱甘肽、電解質(zhì)、色素、毒素和植物甾醇等,使膽汁流成為排泄內(nèi)源性和外源性毒素的重要途徑。川西獐牙菜(Swertia mussotii Franch)自古被認為具有利膽

3、護肝、清熱解毒、祛濕消炎的作用,民間多用做治療肝膽疾病。龍膽苦苷(Gentiopicroside)是其中主要的活性單體成分之一。本研究觀察川西獐牙菜及其單體成分龍膽苦苷對內(nèi)毒素所致大鼠膽汁淤積性肝損傷的保護作用,以及檢測肝細胞膽管膜面轉(zhuǎn)運蛋白BSEP和MRP2表達變化,進一步評價川西獐牙菜及其單體成分龍膽苦苷對肝臟膽汁淤積的影響。
　　方法:
　　1、Sprague Dawley大鼠,清潔級,雄性,體重200~230g,采用

4、隨分組的方式分為6組,每組5只:生理鹽水組、川西獐牙菜組、龍膽苦苷組、LPS+生理鹽水組、LPS+川西獐牙菜組,LPS+龍膽苦苷組,所有大鼠均于處理后16h取材。
　　2、測定各組實驗大鼠膽汁流速,收取血清檢測血清生化指標ALT,AST、TBIL, HE染色觀察肝臟組織病理;
　　3、采用Western blot及qRT-PCR檢測各組大鼠肝組織中BSEP和MRP2在轉(zhuǎn)錄以及蛋白水平的表達。
　　結(jié)果:
　　1、

5、LPS+生理鹽水組與生理鹽水組相比肝損傷指標ALT、AST、TBIL明顯升高(P<0.05),膽汁流速明顯下降(P<0.05),病理損傷明顯;而與LPS+生理鹽水組相比,LPS+川西獐牙菜組和龍膽苦苷組ALT、AST、TBIL明顯下降(P<0.05),膽汁流速明顯升高(P<0.05),對大鼠肝損傷病理有顯著改善作用。
　　2、與生理鹽水組相比,川西獐牙菜組和龍膽苦苷組BSEP蛋白水平的表達明顯增高(P<0.05),mRNA水平無明

6、顯變化;LPS+生理鹽水組與生理鹽水組相比相比BSEP蛋白水平的表達明顯降低(P<0.05);與LPS+生理鹽水組相比,LPS+川西獐牙菜組和LPS+龍膽苦苷組BSEP蛋白水平的表達明顯增高(P<0.05);但各組之間BSEP mRNA變化均不明顯。
　　3、與生理鹽水組相比,川西獐牙菜組和龍膽苦苷組MRP2蛋白水平的表達明顯增高(P<0.05),mRNA水平無明顯變化;LPS+生理鹽水組與生理鹽水組相比相比MRP2 mRNA和蛋