川西獐牙菜醇提物對(duì)HepG2細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、BSEP表達(dá)的影響.pdf

1、聚體,間接起作用。如FXR可誘導(dǎo)BSEP表達(dá),RXRα可作為配體與FXR形成異二聚體,催化FXR對(duì)BSEP的調(diào)控作用,顯著提高FXR對(duì)BSEP的刺激效用,提高FXR的工作效率。
　　目前臨床上可有效治療淤膽的藥物十分有限,熊去氧膽酸雖被廣泛使用,但也存在療效個(gè)體差異大、總體療效不理想、副作用較大等缺點(diǎn)。因此,現(xiàn)今急需解決的問(wèn)題是尋求一種更有效、更安全的治療膽汁淤積的藥物。川西獐牙菜(swertia mussitii franch)

2、是生長(zhǎng)于高原地區(qū)的珍貴中藥,系獐牙菜屬,龍膽科植物。藏醫(yī)里常常單方治療肝臟和膽囊疾病,臨床上多可用于治療急、慢性黃疸性肝炎,但其作用機(jī)制還不十分明確。本研究的重點(diǎn)是川西獐牙菜能否調(diào)控細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3和BSEP的表達(dá),且何種核受體參與其調(diào)控,從而探討其對(duì)治療膽汁淤積的效果和機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)川西獐牙菜醇提物體外刺激HepG2細(xì)胞,觀測(cè)其對(duì)MRP3和BSEP在mRNA和蛋白水平的影響,并觀測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子SP1和核受體CPF、PXR、RXR

3、α的變化狀況。目的是為治療膽汁淤積的臨床用藥提供理論依據(jù)。
　　研究方法:
　　1.不同終濃度的川西獐牙菜醇提物體外刺激HepG2細(xì)胞,運(yùn)用MTT法檢測(cè)不同濃度藥物對(duì)HepG2細(xì)胞生存率影響。目的是尋找對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖影響最小的濃度,即為最佳作用濃度。
　　2.選用最佳濃度川西獐牙菜醇提物于不同時(shí)間點(diǎn)(0h、12h、24h、48h、72h)體外刺激HepG2細(xì)胞,同時(shí)設(shè)立DMSO處理組為陰性對(duì)照,UDCA處理

4、組為陽(yáng)性對(duì)照組。RT-PCR檢測(cè)在不同時(shí)間點(diǎn)HepG2細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、BSEP,核轉(zhuǎn)錄因子SP1及核受體PXR、CPF、RXRαmRNA表達(dá)的變化情況;Western blot檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)HepG2細(xì)胞內(nèi)膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、BSEP、核轉(zhuǎn)錄因子SP1及核受體PXR、CPF、RXRα蛋白表達(dá)的變化情況。
　　結(jié)果:
　　1.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,濃度為25~50uM的川西獐牙菜醇提物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖無(wú)明顯影響。
　

5、　2.RT-PCR結(jié)果顯示:同DMSO組相比,藥物刺激后HepG2細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3 mRNA水平表達(dá)增高,但對(duì)BSEP作用不明顯,可能是通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)起作用,同時(shí)上調(diào)相關(guān)核受體PXR、CPF、RXRαmRNA的表達(dá)(P<0.05)。
　　3.Western blot結(jié)果表明:與陰性對(duì)照組相比,藥物處理組可明顯促進(jìn)膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、BSEP及相關(guān)核受體PXR、CPF、RXRα蛋白的表達(dá)(P<0.05)。其中,對(duì)MRP3、BS

6、EP蛋白水平的上調(diào)作用均強(qiáng)于UDCA處理組(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3 mRNA和蛋白水平的表達(dá),且其表達(dá)增高可能與核轉(zhuǎn)錄因子SP1及核受體PXR、CPF表達(dá)上調(diào)密切相關(guān)。
　　2.HepG2細(xì)胞膜上膽鹽輸出泵BSEP蛋白水平在川西獐牙菜醇提物的刺激下顯著增高且可能和核受體RXRα高表達(dá)相關(guān)。但對(duì)BSEP mRNA水平影響不大,可能對(duì)其基因水平作用是通過(guò)