小蔓長春花提取物治療大鼠腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：小蔓長春花（Vinca minor linn）是夾竹桃科多年生藤本植物，原產(chǎn)歐亞溫帶地區(qū)，我國沒有這種植物的天然資源。該植物的葉子和嫩莖中所含的主要生物堿-長春胺（Vincamine），能夠改善腦供氧和擴(kuò)張腦血管，對(duì)缺血型腦血管病具有明顯療效，且已廣泛應(yīng)用臨床治療，并取得明顯的治療效果，但小蔓長春花天然提取物（Vinca，minor linn extract，VMLE）是否具有同樣的效果，有待研究。本研究觀察醇提法得到的VMLE對(duì)

2、大鼠實(shí)驗(yàn)性腦梗死的影響，明確VMLE的保護(hù)和治療作用，并觀察VMLE的安全性及副作用，為進(jìn)一步的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：1.小蔓長春花的提取：小蔓長春花剪碎，乙醇浸泡，加熱回流，濾液濃縮即得，并用高效液相色譜法分析長春胺的含量。2.VMLE的急毒試驗(yàn)：通過灌胃連續(xù)觀察昆明小鼠14天的體征變化及死亡情況，來評(píng)價(jià)VMLE的安全性。3.局灶性腦缺血線栓法造模：采用Zea-Longa傳統(tǒng)方法即采用線栓阻斷大鼠大腦中動(dòng)脈，建立

3、局灶性腦缺血模型（middle cerebral artery occlusion，MCAO）。4.分組給藥：（1）將Sprague Dawley（SD）雄性大鼠按體重（250g-300g）隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組又分為提取物高劑量組（10g/kg/d）、低劑量組（5g/kg/d）；對(duì)照組分為尼莫地平對(duì)照組（10mg/kg/d）、模型對(duì)照組（生理鹽水）和正常對(duì)照組（生理鹽水）。（2）用小蔓長春花提取物對(duì)大鼠進(jìn)行模前、模后干預(yù)實(shí)驗(yàn)，

4、以MCAO大鼠腦梗死體積、認(rèn)知功能、血液流變學(xué)及血液生化（測(cè)血清中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活性和丙二醛（MDA）含量）為指標(biāo)，觀察小蔓長春花提取物對(duì)MCAO大鼠的影響。①模前干預(yù)實(shí)驗(yàn)即預(yù)防實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)中SD大鼠在造模前按體重隨機(jī)分五組，即提取物高、低劑量組、尼莫地平組、模型組和正常對(duì)照組，并按組別給予高、低劑量提取物，尼莫地平和生理鹽水，連續(xù)灌胃7d，于第7d灌胃后1h行造模術(shù)。造模24h后進(jìn)行神經(jīng)功

5、能缺損評(píng)分，48h后行水迷宮實(shí)驗(yàn)，連續(xù)5d，模后第7d從左心室取血行血流變學(xué)實(shí)驗(yàn)，然后取腦觀察腦梗死范圍。②模后干預(yù)實(shí)驗(yàn)即治療實(shí)驗(yàn)，大鼠造模清醒后即給予神經(jīng)功能缺損評(píng)分，符合入選標(biāo)準(zhǔn)的錄用并隨機(jī)分組，按組別給予高、低劑量提取物、尼莫地平和生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃7d，其余實(shí)驗(yàn)操作同模前干預(yù)實(shí)驗(yàn)。血液生化的檢測(cè)方法是預(yù)防組造模前灌胃2d，造模48h后從左心室取血行血液生化檢查；治療組造模后灌胃2d，取血行血液生化的檢測(cè)。
　　 實(shí)驗(yàn)

6、結(jié)果均采用SSPS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)用x±s表示，數(shù)據(jù)處理采用單因素方差分析或組間t檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.高效液相色譜法分析測(cè)得VMLE中長春胺含量為6.878mg/g。
　　 2.小蔓長春花提取物的急毒藥理試驗(yàn)：提取物小鼠最大耐受量在14g/kg～28g/kg劑量范圍內(nèi)；最大無毒劑量為7g/kg～14g/kg。28g/kg劑量組灌胃后出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍、抽搐、紫紺、稀便，兩天內(nèi)死亡6只，其他各組未見明顯

7、異常。
　　 3.在本研究的預(yù)防實(shí)驗(yàn)和治療實(shí)驗(yàn)中，模型組所有指標(biāo)與正常組比較，P均小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.VMLE對(duì)MCAO大鼠的影響（1）VMLE對(duì)MCAO大鼠認(rèn)知功能的影響：預(yù)防組MCAO大鼠的定位航行潛伏期及空間探索穿越平臺(tái)次數(shù)：VMLE高劑量組（高預(yù)組）：43929±15073.67ms、5.8±2.28，低劑量組（低預(yù)組）：48831±26736.28ms、5.6±3.21，模型組：80091±

8、26292.53ms、2.0±2.12，高、低劑量組與模型組比較，潛伏期均有所縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)均有所增多，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；治療組的潛伏期及穿越平臺(tái)次數(shù)：高劑量組（高治組）：41184±21096.60ms、4.8±1.92，低劑量組（低治組）：39259±32893.18ms、4.6±1.14，模型組：78003±25471.69ms、1.8±1.79，高、低劑量組與模型組比較，潛伏期均縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)均增多，有統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、差異（P<0.05）。（2）VMLE對(duì)MCAO大鼠腦梗死范圍的影響：預(yù)防組：高預(yù)組腦梗死體積比：0.080±0.010，低預(yù)組：0.091±0.039，模型組：0.153±0.058，高、低劑量組與模型組比較，腦梗死體積比縮小，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；治療組：高治組：0.055±0.033，低治組：0.063±0.030，模型組：0.143±0.084，高、低劑量組與模型組比較，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（3）VMLE對(duì)MCAO

10、大鼠血液生化的影響：預(yù)防組：高預(yù)組SOD和GSH-PX活性及MDA含量分別為：144.05±14.03、195.40±18.66、9.74±0.25，低預(yù)組：146.80±8.21、92.00±22.35、9.72±0.94，模型組：127.17±6.17、162.63±26.96、11.12±0.84，高、低劑量組與模型組比較，SOD和GSH-PX活性增強(qiáng)，MDA含量，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；治療組：高治組：143.394±14

11、.29、195.0±18.29、9.39±0.69，低治組：145.87±12.09、190.5±8.25、9.12±0.86，模型組：126.25±3.86、153.5±38.63、11.0±0.77，高、低劑量組與模型組比較，SOD和GSH-PX活性增強(qiáng)，MDA含量，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（4）VMLE對(duì)MCAO大鼠血液流變學(xué)的影響：VMLE預(yù)防組：高預(yù)組血漿粘度、全血粘度10、全血粘度180、紅細(xì)胞壓積（Hct）、紅細(xì)胞聚

12、集指數(shù)（EAI）、紅細(xì)胞剛性指數(shù)（ERI）：1.21±0.05、10.30±2.00、4.51±0.38、42.4±1.14、0.83±0.09、18.40±6.26，低預(yù)組：1.22±0.12、10.61±1.04、4.77±0.64、43.0±1.58、0.82±0.07、18.57±2.50，模型組：1.38±0.10、12.51±1.67、5.58±0.44、48.2±2.86、1.03±0.16、26.73±1.84；高、低劑

13、量組與模型組比較，血液粘稠度減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；治療組血漿粘度、全血粘度10、全血粘度180、Hct、EAI、ERI：高治組：1.25±0.08、10.35±2.02、4.54±0.34、41.7±1.08、0.86±0.11、17.87±6.01，低治組：1.24±0.12、10.51±1.02、4.75+0.61、42.8±1.43、0.84±0.08、18.48±2.47，模型組：1.40+0.13、12.45±1

14、.60、5.68±0.54、47.9±2.76、1.01±0.13、26.61±1.78，高、低劑量組與模型組比較，血液粘稠度減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 5.在本研究的預(yù)防實(shí)驗(yàn)和治療實(shí)驗(yàn)中，VMLE高、低劑量組指標(biāo)數(shù)據(jù)比較，均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。高、低劑量組與尼莫地平組比較：P>0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與正常組比較：P>0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，1.VMLE可增

15、強(qiáng)腦組織對(duì)缺血的耐受性，可減輕局灶性腦缺血再灌注對(duì)大鼠腦組織的損傷，并可減小腦梗死體積。2.VMLE能改善MCAO大鼠血液粘稠度，增加腦組織血流量，抑止血栓的形成，降低或減少了腦組織缺血導(dǎo)致的不可逆損傷。3.VMLE可提高血液中SOD，GSH-PX的活力，清除毒性自由基，從而降低了MDA的含量。4.VMLE可改善MCAO大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。以上結(jié)果均提示VMLE對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血具有一定預(yù)防和治療作用，這為進(jìn)一步擴(kuò)大其開發(fā)研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)