重組人胸腺素β4二聚體的心臟保護功能研究.pdf

1、人胸腺素β4(Thymosinβ4,Tβ4)是一個由43個氨基酸組成的酸性小肽,在物種中高度保守,廣泛分布于除紅細胞外的大部分細胞中。它參與人體許多重要的生命活動,能夠促進傷口愈合,促進毛發(fā)生長、抗炎、促進組織修復,抗內毒素性休克、促血管生成,維持細胞骨架的動態(tài)平衡等。目前 Tβ4對于多種創(chuàng)傷性疾病以及心肌梗死后心臟保護作用的研究均已進入臨床試驗階段。然而現(xiàn)階段使用的Tβ4均來源于化學合成。長度為43個氨基酸的多肽化學合成效率低,造價高

2、,且環(huán)境污染嚴重,大規(guī)模生產(chǎn)限制性大。Tβ4的基因工程產(chǎn)品又因其分子較小,原核表達后易降解而難于純化。在前期研究中,我們利用基因工程方法制備了 Tβ4二聚體蛋白,克服了化學合成和原核表達的缺陷。該二聚體蛋白的促傷口愈合活性明顯高于單體且純化方法簡單易行。該二聚體蛋白的構建,純化方法和大規(guī)模生產(chǎn)工藝,獲得兩項中國發(fā)明專利(ZL200810232709.9;ZL201110376361.2)。對于該二聚體蛋白促傷口愈合功能的研究獲得國家新藥

3、創(chuàng)制重大專項的資助(2011ZXJ09104-01)。本課題在上述基礎上,將進一步研究 Tβ4二聚體蛋白在心肌梗死后的心臟保護作用,并對其作用機制進行初步探討,為拓展該基因工程藥物的適應癥奠定基礎。
　　本實驗通過結晶紫實驗、劃痕實驗、小管形成、流式細胞術及激光共聚焦檢測Tβ4②的生物學活性,通過構建小鼠心梗模型驗證Tβ4②對心肌梗死后的心臟保護功能,通過熒光實時定量PCR對Tβ4二聚體的作用機制進行初步探討。結晶紫實驗證明了Tβ

4、4二聚體促進人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)增殖;劃痕實驗證明了Tβ4二聚體促進內皮細胞遷移;小管形成實驗證明了 Tβ4二聚體能夠促進內皮細胞的血管形成;激光共聚焦實驗證明了 Tβ4二聚體能夠抑制心臟成纖維細胞分泌膠原;流式細胞術證明了 Tβ4二聚體能夠抑制缺氧引發(fā)的心肌細胞凋亡。通過構建小鼠心梗模型,證明了 Tβ4二聚體能夠增加梗死區(qū)邊緣的血管密度,減少梗死面積,控制心肌肥大,提高心臟功能。熒光實時定量PCR證明了Tβ4二聚體可上調A