氫基胍對(duì)梗阻性黃疸大鼠肝細(xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 梗阻性黃疸(obstructive jaundice，OJ)是外科臨床常見的病理狀態(tài)，它可導(dǎo)致機(jī)體各系統(tǒng)靶器官的損害以及相應(yīng)的病理生理改變，其中最主要的是肝細(xì)胞損傷，也是其它并發(fā)癥的重要誘因。OJ時(shí)肝臟的損害機(jī)制復(fù)雜，其中內(nèi)毒素的產(chǎn)生導(dǎo)致腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)、一氧化氮(nitric oxide，NO)等炎癥因子損傷是一個(gè)重要的方面。有研究表明OJ時(shí)大量產(chǎn)生的NO

2、也參與對(duì)肝細(xì)胞的損傷。目前NO對(duì)OJ時(shí)肝細(xì)胞損傷影響方面的研究報(bào)道不多。本研究利用大鼠OJ模型對(duì)大鼠血清和肝組織NO含量、肝細(xì)胞的氧化損傷、肝細(xì)胞病理變化、肝細(xì)胞的凋亡以及氨基胍(aminoguanidine，AG)對(duì)大鼠進(jìn)行干預(yù)后各指標(biāo)的變化進(jìn)行了研究，并進(jìn)一步從NO對(duì)OJ肝細(xì)胞損傷機(jī)制方面作了探討。
　　 方法:
　　 1.動(dòng)物和分組：將48只雄性S-D大鼠，體重250g-300g，隨機(jī)分為6組：①假手術(shù)組(S組)；

3、②膽管結(jié)扎組(BDL)；③陽性對(duì)照組：膽管結(jié)扎+古拉定組125mg/Kg(BDL+GLD)；④膽管結(jié)扎+低劑量AG組25mg/Kg(BDL+LAG)；。⑤膽管結(jié)扎+中劑量AG組50mg/Kg(BDL+MAG)；⑥膽管結(jié)扎+高劑量組100mg/Kg(BDL+HAG)
　　 2.動(dòng)物模型制作：①組開腹后單純游離膽管不予結(jié)扎，②、③、④、⑤、⑥組行膽總管結(jié)扎術(shù)，并離斷膽管，術(shù)后6小時(shí)開始進(jìn)食，④、⑤、⑥各組術(shù)后第3日按不同劑量腹腔注射

4、氨基胍，分別為OL25mg/Kg、OM50mg/Kg、OH100mg/Kg。③組術(shù)后第3日腹腔注射古拉定(125mg/Kg)。
　　 3.檢測(cè)方法和觀測(cè)指標(biāo)：①血液中一氧化氮(NO)、肝組織中NO、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量測(cè)定按照試劑盒說明書進(jìn)行；②肝組織蘇木素-伊紅染色觀察病理變化；③通過免疫組織化學(xué)染色觀察肝組織表達(dá)的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，i

5、NOS)；④行脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記(Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTPnick-end-labeling，TUNEL)染色檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡數(shù)。
　　 4.所有結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(()±s)表示，用SPSS10.0進(jìn)行單因素方差分析t檢驗(yàn)，P<0.05即認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01有顯著性差異。。
　　 結(jié)果：
　　 1.假手術(shù)

6、組大鼠行動(dòng)敏捷，對(duì)疼痛刺激反應(yīng)靈敏，皮膚、尿液顏色無改變；腹腔無腹水，肝臟顏色鮮紅，表面有光澤，質(zhì)地柔軟，膽管未見擴(kuò)張；光鏡下見：肝細(xì)胞無腫脹、壞死，肝細(xì)胞索排列整齊。而②、③、④、⑤、⑥各組大鼠均有不同程度的行動(dòng)遲緩、對(duì)疼痛刺激反應(yīng)遲鈍，皮膚、尿液呈黃色，腹腔有少量淡黃色腹水；肝臟顏色淡黃，呈程度不等的瘀膽狀，表面無光澤，結(jié)扎處近肝側(cè)膽總管呈直徑約0.3cm-0.6cm不等的擴(kuò)張；細(xì)胞呈不同程度腫脹、脂肪變性，肝內(nèi)小膽管擴(kuò)張，少量纖維

7、組織增生。
　　 2.②組、③組、④組、⑤組、⑥組血清和肝組織中NO含量、肝組織MDA值以及肝細(xì)胞凋亡指數(shù)均明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，而各組SOD值則明顯低于假手術(shù)組(P<0.01)。與②組相比，④組、⑤組、⑥組在給予AG后血清和肝組織中NO含量有不同程度下降(P<0.01)，血清MDA值和肝細(xì)胞凋亡指數(shù)下降(P<0.01)，SOD值升高(P<0.01)。與②組比較，③組血清和肝組織中NO含量無明顯變化(P>0.05)，

8、而血清MDA值和肝細(xì)胞凋亡指數(shù)降低(P<0.01)，SOD值升高(P<0.01)。
　　 3.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肝組織iNOS蛋白陽性細(xì)胞為呈棕黃色顆粒的陽性反應(yīng)產(chǎn)物，假手術(shù)組未見陽性細(xì)胞，iNOS表達(dá)(-)，而②組、③組、④組、⑤組、⑥組肝組織出現(xiàn)明確的陽性細(xì)胞，iNOS表達(dá)(+)，提示梗阻性黃疸肝細(xì)胞有iNOS蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1.梗阻性黃疸時(shí)，大鼠肝組織有iNOS表達(dá)并催化產(chǎn)生大量NO，導(dǎo)致血