雷帕霉素對梗阻性黃疸大鼠肝臟保護作用的相關研究.pdf

1、目的：本實驗采用膽總管結扎方法建立大鼠梗阻性黃疸模型，對模型大鼠予雷帕霉素（Rapamycin，RPM）干預，通過對術后不同時段肝細胞結構、功能的變化以及相關炎癥因子的表達及其相互關系等的研究，觀察大鼠肝細胞顯微結構的變化，檢測肝組織中TNF-αmRNA的表達，探討雷帕霉素對肝臟的保護作用，從而為實驗研究和臨床治療提供一定的基礎。
　　方法：⑴實驗分組:54只健康雄性SD大鼠隨機分為3組， A組:大鼠麻醉成功后，取上腹部正中切口進

2、腹，游離膽總管末端但不結扎，關腹;B組:大鼠麻醉成功后，正中切口入腹，游離膽總管后，于近十二指腸系膜處以4-0號絲線結扎，關腹，制作成OJ模型。術后每只大鼠予RPM0.4mg/(kg.d)皮下注射;C組:造模方法同B組，術后每天每只大鼠給予0.4mg/(kg.d)生理鹽水皮下注射直至處死。分別于術后1、3、5d處死大鼠，每個時間段6只。⑵比較不同時段大鼠指標變化:分別于術后1、3、5d切取肝左外葉及抽取下腔靜脈血作為標本，檢測血清谷丙轉

3、氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)及內毒素(ET)水平，肝組織丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平，RT-PCR技術檢測肝組織中TNF-α mRNA的表達情況，光鏡下觀察不同時段肝組織病理學變化。
　　結果：①手術成功的標準是手術結束后，大鼠即刻蘇醒，翻身，并能維持有效呼吸、心跳。②血清ALT、AST和ET水平的變化:血清ALT和AST水平是臨床反映肝細胞損傷和壞死程度的敏感指標，ET水平可以反映機體炎癥變化，相同時段

4、B和C組的血清ALT、AST和ET水平較A組顯著升高(P＜0.01)，但B組較C組相同時段低(P＜0.01)。③肝組織MDA、SOD水平的變化:MDA能反映細胞膜脂質過氧化的程度，間接反映細胞損傷的程度;氧自由基清除劑SOD，可以間接反映體內氧自由基水平及脂質過氧化的損傷程度。與A組比較，B組以及C組的肝組織MDA水平升高，SOD水平降低，差異具有顯著性(P＜0.01);B組與C組比較，肝組織MDA水平顯著降低、SOD水平顯著升高，差異

5、具有顯著性(P＜0.01)。④肝組織中TNF-α mRNA含量:B組和C組TNF-α mRNA含量較A組顯著升高(P＜0.01)。B組TNF-α mRNA的含量較C組顯著下降(P＜0.01)。⑤肝組織HE染色觀察:A組肝臟細胞形態(tài)基本正常，肝小葉、中央靜脈、匯管區(qū)結構清晰，肝細胞索排列整齊。B組和C組示鼠肝血竇擴張，膽管細胞增生伴炎性細胞浸潤，肝細胞濁腫。隨著時間的延長C組肝血竇擴張、小葉中央性淤膽、細胞腫脹及炎性細胞浸潤較B組更加明顯