CXCR4，c-Met與IGF1R在肌損傷組織中肌衛(wèi)星細胞的表達.pdf

1、[背景與目的]Mauro[1]等1961年首次在蛙骨骼肌中發(fā)現，肌衛(wèi)星細胞是一種源于胚胎中胚層的干細胞。肌衛(wèi)星細胞的增殖和成肌分化受到多種生長因子的調節(jié)，有人推測其中的基質衍生因子-1(SDF-1)、肝細胞生長因子(HGF)和胰島素樣生長因子1(IGF1)等三個因子在肌肉再生的起始階段可能起著重要作用。細胞因子需通過相應受體的介導才能發(fā)揮其功能，而基質細胞衍生因子受體(CXCR4)、肝細胞生長因子受體(c-Met)和胰島素樣生長因子1受

2、體(IGF1R)被認為是上述三個因子的特異性受體。本課題旨在觀察CXCR4，c-Met和IGF1R在正常肌肉組織和注射心臟毒素后所致的肌肉損傷的股四頭肌中肌衛(wèi)星細胞的表達情況，為進一步研究某些肌肉變性疾病如進行性肌營養(yǎng)不良(DMD)在發(fā)病中的分子機制和治療肌肉退行性變提供參考依據。[方法]C57雄性小鼠14只，飼養(yǎng)于IVC(獨立送排風籠具)實驗室。隨機分為7組，1～6組左側股四頭肌局部注射心臟毒素(5μg/只)，右側股四頭肌為對照，第7

3、組用于分離正常肌衛(wèi)星細胞。1～6組分別在注射后1d，4d、1w、2w、4w、6w頸椎脫臼處死小鼠，完整分離出股四頭肌。浸入4％甲醛溶液中固定，常規(guī)病理包埋切片染色，與對照C57小鼠股四頭肌進行組織學和免疫組織化學比較分析。取上述股四頭肌與對照C57小鼠股四頭肌進行逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)比較分析，了解三個受體的原位表達情況。從非注射組C57小鼠股四頭肌中分離出肌衛(wèi)星細胞，觀察細胞生長情況，利用免疫細胞化學方法和流式細胞技術，

4、檢測三個受體在肌衛(wèi)星細胞的體外表達情況。[結果]免疫組織化學和逆轉錄聚合酶鏈式反應結果顯示：正常小鼠股四頭肌中CXCR4，c-Met和IGF1R在肌衛(wèi)星細胞上僅有少量的表達；與對照組比較，實驗組注射心臟毒素24h后，三個受體表達即明顯增加并持續(xù)到觀察終點的第六周，其中CXCR4、IGFIR表達量在第二周達到高峰，c-Met表達量在第一周達到高峰，且直到觀察期間末(第6周)，其表達量仍高于正常肌肉組織。從非注射組股四頭肌分離的肌衛(wèi)星細胞做

5、免疫細胞化學和流式細胞檢測顯示：CXCR4、c-Met和IGF1R僅有少量的表達，其中流式細胞檢測結果CXCR4陽性表達率為4.6％，c-Met陽性表達率為3.0％，IGF1R陽性表達率為3.3％。[結論]1．本文首次使用心臟毒素骨骼肌注射模型，探討CXCR4、c-Met和IGFIR在骨骼肌再生過程中的作用；結果提示，CXCR4、c-Met和IGF1R可能是肌肉損傷修復過程的關鍵蛋白。2．本實驗通過改進骨骼肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)方法，使肌衛(wèi)星細