脂多糖對小鼠骨髓源性平滑肌祖細胞表達CXCR4的影響.pdf

1、目的：通過觀察脂多糖(LPS)對離體小鼠骨髓源性平滑肌祖細胞(vascular smooth progenitor muscle cell，SPC)膜表面基質(zhì)細胞衍生因子受體表達的影響，探討SDF-1/CXCR4軸在動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展過程中所起的作用，從而探索抗動脈粥樣硬化的可能方法。
　　 方法：復蘇本實驗室已成功分選出的平滑肌祖細胞，并將其傳代培養(yǎng)，按照實驗設(shè)計分別分為六個組：①正常對照組：加入普通培養(yǎng)基；②低劑量組(L

2、組)：加入LPS終濃度為1ug/mL，孵育6h；③中劑量組(M組)：加入LPS終濃度為10ug/mL，孵育6 h；④高劑量組(H組)：加入LPS終濃度為30ug/mL，孵育6 h；⑤12 h組：加入LPS終濃度為10ug/mL，孵育12 h；⑥24 h組：加入LPS終濃度為10ug/mL，孵育24 h。用免疫熒光染色及共聚焦激光掃描顯微鏡分析和蛋白免疫印跡檢測平滑肌祖細胞基質(zhì)細胞衍生因子受體蛋白表達，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應檢測平滑肌祖細胞基

3、質(zhì)細胞衍生因子受體mRNA的表達，觀察脂多糖對平滑肌祖細胞表達基質(zhì)細胞衍生因子受體的時效和濃度關(guān)系。
　　 結(jié)果：免疫熒光染色和共聚焦激光掃描顯微鏡分析測得的結(jié)果與RT-PCR和Western blot檢測的結(jié)果相一致，未給予脂多糖刺激的平滑肌祖細胞有基礎(chǔ)水平的基質(zhì)細胞衍生因子受體表達，脂多糖是基質(zhì)細胞衍生因子受體的強誘導物。當刺激時間恒定時（6h），隨著刺激濃度的增加，L組和M組的基質(zhì)細胞衍生因子受體表達逐漸增強，與正常對照組

4、相比均具有顯著性差異（P＜0.01），H組開始下降。當刺激濃度恒定時（10ug/mL），隨著刺激時間的延長，M組和12h組的表達量也逐級增強，與正常對照組相比均具有顯著性差異（P＜0.01）。在所有組中，12h組表達最強，其mRNA和蛋白水平分別為基礎(chǔ)水平的6.10倍和4.76倍，24h組又下降，但仍高于基礎(chǔ)水平。
　　 結(jié)論：平滑肌祖細胞能表達低水平的CXCR4，動脈粥樣硬化的危險因子脂多糖能夠使平滑肌祖細胞的CXCR4水平上