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1、目的:
骨關(guān)節(jié)炎(OA)是一種以進(jìn)行性關(guān)節(jié)軟骨破壞為主要特征的關(guān)節(jié)疾病,其中聚蛋白多糖的丟失是關(guān)節(jié)軟骨破壞的主要早期病理表現(xiàn)。目前研究表明,聚蛋白多糖酶和基質(zhì)金屬蛋白酶是與聚蛋白多糖的降解密切相關(guān)的兩組酶,但在人類疾病狀態(tài)下哪種酶起主要作用仍然存在爭(zhēng)議。已有多個(gè)研究分別對(duì)聚蛋白多糖酶和基質(zhì)金屬蛋白酶在人類骨關(guān)節(jié)炎病變關(guān)節(jié)中的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),但以上各酶及其蛋白降解產(chǎn)物在骨關(guān)節(jié)炎不同時(shí)期關(guān)節(jié)液中的表達(dá)及其作用的研究尚無報(bào)道。
2、本研究的目的是觀察和比較聚蛋白多糖酶(ADAMTS-4、5)和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1、3)以及蛋白產(chǎn)物在骨關(guān)節(jié)炎不同時(shí)期關(guān)節(jié)液中的表達(dá),探討其在早、中、晚期骨關(guān)節(jié)炎中的作用。
材料和方法:
選擇2008年6月至2011年5月就診的膝關(guān)節(jié)OA患者144例,男性38例,女性106例,年齡18歲-86歲,平均58.5歲±13.6歲。所有患者膝關(guān)節(jié)軟骨退變的程度根據(jù)MRI Recht分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)和關(guān)節(jié)鏡下Outerb
3、ridge分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí),并根據(jù)分級(jí)結(jié)果進(jìn)行早、中、晚期分組,其中Ⅰ-Ⅱ級(jí)組成早期OA組(65例),Ⅲ級(jí)組成中期OA組(25例),Ⅳ級(jí)組成晚期OA組(54例)。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELI SA)對(duì)144例關(guān)節(jié)液中ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-1、MMP-3及蛋白產(chǎn)物ARGxx、FFGxx的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),以ELISA光密度(OD)值代表所測(cè)各項(xiàng)在關(guān)節(jié)液中的濃度。應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western blot)對(duì)24例關(guān)節(jié)
4、液(早、中、晚期OA組各8例)中ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-1、MMP-3及蛋白產(chǎn)物ARGxx、FFGxx的蛋白表達(dá)進(jìn)行測(cè)定,以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參。所測(cè)各指標(biāo)在早、中、晚期OA組之間的差異用單因素方差分析和Kruskal-Wallis檢驗(yàn)分析,兩組間的兩兩比較采用最小顯著性差異法(LSD法)分析,聚蛋白多糖酶、基質(zhì)金屬蛋白酶與其蛋白產(chǎn)物之間的相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析。
結(jié)果:
5、r> (1)比較酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的OD值發(fā)現(xiàn):ADAMTS-4、5在早期和晚期OA關(guān)節(jié)液中的表達(dá)水平明顯升高,且ADAMTS-4在早期OA關(guān)節(jié)液中的表達(dá)水平顯著高于晚期OA關(guān)節(jié)液中的表達(dá)水平(P<0.01); MMP-1在晚期OA關(guān)節(jié)液中高表達(dá),而MMP-3在早期OA關(guān)節(jié)液中高表達(dá)(P<0.05);ARGxx在早期OA關(guān)節(jié)液中的表達(dá)水平顯著高于中、晚期OA關(guān)節(jié)液中的表達(dá)水平(P<0.01),而FFGxx主要出現(xiàn)在晚期OA關(guān)節(jié)液中(
6、P<0.01);
(2)通過對(duì)比ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn):ADAMTS-5、MMP-3、ARGxx在3組關(guān)節(jié)液中的表達(dá)水平均分別高于ADAMTS-4、MMP-1、FFGxx在相應(yīng)各組關(guān)節(jié)液中的表達(dá)水平(P<0.01)。
(3)相關(guān)性分析結(jié)果顯示:OA關(guān)節(jié)液中ADAMTS-4和ADAMTS-5的表達(dá)均與ARGxx呈正相關(guān),但ADAMTS-4與ARGxx的相關(guān)性(r=0.530)高于ADAMTS-5(r=0.258);
7、MMP-3的表達(dá)與產(chǎn)物FFGxx呈正相關(guān)(r=0.475,P<0.01),MMP-1與產(chǎn)物FFGxx無明顯相關(guān)性(P>0.05)。
(4)蛋白免疫印跡分析結(jié)果顯示:ADAMTS-4在早期OA組高表達(dá)(P<0.05),ADAMTS-5在早期和晚期OA組高表達(dá)(P<0.05);MMP-1及FFGxx在晚期OA組高表達(dá)(P<0.05);MMP-3在早期OA組的表達(dá)量高于中期的表達(dá)(P<0.05);ARGxx在早、晚期OA組的表達(dá)
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