miR-26b影響脂肪細胞胰島素敏感性的機制分析.pdf

1、目的：闡明miR-26b過表達對脂肪細胞胰島素敏感性調控的分子機制。
　　方法：
　　1.高脂飲食喂養(yǎng)SD大鼠，建立飲食誘導肥胖（Diet-induced obesity,DIO）大鼠模型。高糖、高胰島素環(huán)境下誘導建立3T3-L1/HPA-v胰島素抵抗脂肪細胞模型；
　　2.采用Real time PCR技術，檢測動物及細胞模型中miR-26b的表達；
　　3.胰島素（Insulin）、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤

2、（3-isobutyl-1-methyxanthine,MIX）、地塞米松（Dexamethasone,Dex）混合誘導劑誘導3T3-L1前體脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞。胰島素、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、地塞米松和羅格列酮（rosiglitazone）混合誘導劑誘導HPA-v前體脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞；
　　4.構建miR-26b過表達慢病毒表達載體，感染人成熟脂肪細胞；48h后在熒光顯微鏡下，判斷病毒感染的效率；
　

3、　5.采用同位素標記葡萄糖進行糖攝取實驗，檢測胰島素刺激下脂肪細胞對葡萄糖攝取量的變化；
　　6. Western Blot技術，檢測 PI3K信號通路中關鍵蛋白分子胰島素受體（insulin recepor,IR）、胰島素受體底物（insulin receptor substrate,IRS）、AKT、p-AKT、葡萄糖轉運體-4（Glucose transporter type4,GLUT4）的表達及GLUT4膜蛋白（mGLU

4、T4）的含量；
　　7.生物信息學預測miR-26b的靶標，采用熒光素酶報告實驗進行靶標驗證。
　　結果：
　　1.高脂飲食誘導后SD大鼠出現肥胖及代謝紊亂的特征，成功構建DIO大鼠模型。DIO大鼠腸系膜脂肪組織中miR-26b的表達水平下降，且與應用穩(wěn)態(tài)模型評估的胰島素抵抗指數（Homeostasis model assessment of insulin resistance, HOMA-IR）呈顯著負相關；

5、>　　2.胰島素抵抗細胞模型中miR-26b的表達水平顯著降低；
　　3.miR-26b過表達促進脂肪細胞胰島素刺激下的葡萄糖攝?。?br>　　4.miR-26b過表達可以顯著上調脂肪細胞胰島素刺激下的mGLUT4含量；
　　5.miR-26b過表達可以顯著提高磷脂酰肌醇激酶3（phosphatidylinositol3-kinase, PI3K）胰島素信號通路中p-AKT水平；
　　6.熒光素酶實驗的結果表明，第10