PGE受體敲除的小鼠增加胰島素的敏感性.pdf

1、目的:
　　 胰島素抵抗是2型糖尿病的重要特征,表現(xiàn)為糖量異?；蚋哐?胰島素抵抗是靶組織對(duì)胰島素敏感性降低,肝臟糖異生紊亂導(dǎo)致的肝糖輸出增多是機(jī)體高血糖發(fā)生的重要原因。流行病學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),不管是在輕度糖尿病人群還是重度糖尿病人群中,肝臟糖異生作用都是增強(qiáng)的,我們實(shí)驗(yàn)室最近研究表明前列腺素E(ProstaglandinE)在糖尿病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用,我們將關(guān)注于PGE與肝糖代謝和胰島素抵抗之間是否存在聯(lián)系,旨在尋找治療胰

2、島素抵抗和糖尿病新的突破點(diǎn)。
　　 方法:
　　 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選取和標(biāo)本處理
　　 以8周齡大無(wú)特定病原體SPF(specificpathogenFree)級(jí)雄性小鼠野生型(WideType,WT)和前列腺素E受體敲除(EPKnockout,EP-KO)小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)禁食、小劑量鏈脲菌素(STZ)多次注射誘導(dǎo)糖尿病(DiabetesMellitus,DM)和高脂高糖(HighFatDiet,HFD)飲食喂養(yǎng)

3、16周誘導(dǎo)胰島素抵抗(InsulinResistanceIR)三種實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證前列腺素E與胰島素抵抗和糖尿病之間的關(guān)系。
　　 2小鼠攝入食物的測(cè)定
　　 注射STZ和喂養(yǎng)HFD的小鼠測(cè)日基礎(chǔ)攝食量,結(jié)果以g表示。
　　 3小鼠體重的測(cè)定
　　 注射STZ和喂養(yǎng)HFD小鼠用天平測(cè)體重,結(jié)果以g表示。
　　 4血糖的測(cè)定
　　 雅培血糖儀與之配套的試紙取小鼠尾部靜脈血,結(jié)果是mg/dl表示。

4、
　　 5肝臟組織mRNA的測(cè)定
　　 用Trizol提取肝臟mRNA,以β-actin作為內(nèi)參,反轉(zhuǎn)錄后用real-timePCR測(cè)定G-6-P,PEPCK表達(dá)量。
　　 6注射STZ后胰腺面積的計(jì)算
　　 胰腺組織分別做免疫組織化學(xué)IHC(Immunohistochemicalstaining)和HE蘇木精伊紅(HematoxylinEosinstaining)染色,顯微鏡下取40X拍照,使用IPWI

5、N60計(jì)算胰腺損害面積。
　　 7數(shù)據(jù)分析
　　 數(shù)據(jù)x-±s表示,用Graphpadprism軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,WT和EP-KO進(jìn)行比較,用students't檢驗(yàn),P＜0.05為差異有顯著性變化。
　　 結(jié)果:
　　 1食物攝入變化
　　 注射STZ和喂養(yǎng)HFD組食物攝入量均無(wú)明顯變化。
　　 2體重變化
　　 注射STZ組小鼠體重?zé)o明顯變化;喂養(yǎng)HFD組小鼠體重有顯著差異。

6、
　　 3血糖變化
　　 禁食后,WT組血糖濃度是168.3±2.9mg/dl,EP-KO組血糖濃度是133.7±3.5mg/dl;血糖有顯著差異,P＜0.05;注射STZ后,WT組血糖濃度是380.6±21.2mg/dl,EP-KO組血糖濃度是210.3±15.7mg/dl,血糖有顯著差異,P＜0.05;高脂高糖喂養(yǎng)WT組血糖濃度是251.2±11.2mg/dl,EP-KO組血糖濃度是198.4±9.7mg/dl,血糖

7、有顯著差異,P＜0.05。
　　 4G-6-PPEPCK表達(dá)變化
　　 禁食16小時(shí)后,WT組葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase,G-6-P)表達(dá)量0.42±0.02,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvatecarboxykinase,PEPCK)表達(dá)量0.06±0.02,EP-KO組G-6-P表達(dá)量0.10±0.02,PEPCK表達(dá)量0.02±0.01;(P＜0.05)

8、WT組的G-6-P和PEPCK的表達(dá)量均高于EP-KO組,表達(dá)量有顯著差異,P＜0.05。
　　 5胰腺面積的計(jì)算
　　 注射STZ組小鼠,做HE和IHC染色,WT組胰腺面積損傷至0.20±0.08/0.20±0.07;EP-KO組胰腺面積損傷至0.57±0.020.73±0.02,面積損傷有顯著差異,P＜0.05。
　　 結(jié)論:
　　 前列腺素E受體EP敲除的小鼠對(duì)胰島素的敏感性增加,部分是通過(guò)限制糖異