腹股溝皮下注射免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎及治療前后鼻黏膜microRNA的變化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文對腹股溝皮下注射免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎及治療前后鼻黏膜microRNA的變化進行了研究。本研究分為兩個部分:
  第一部分:腹股溝皮下注射法免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎的實驗研究。
  目的:探討腹股溝皮下注射法免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎的可行性。
  方法:36只雌性BALB/c小鼠,6~8周齡,隨機分為6組,每組6只,包括A空白組、A模型組、A治療組、B空白組、B模型組和B治療組(A為腹股溝皮下注射,B為頸背部皮下注射)

2、。卵清蛋白(ovalbumin,OVA)AR模型建立成功后治療組用OVA進行免疫治療,隔天一次,共15次。鼻腔連續(xù)激發(fā)第七天時,進行小鼠AR癥狀評分,鼻黏膜變色酸2R染色統(tǒng)計鼻黏膜嗜酸性粒細胞(eosinophils,EOS)數(shù),ELISA法檢測血清OVA-sIgE表達和鼻腔灌洗液中IL-4和IFN-γ表達,計算IFN-γ與IL-4比值。以SPSS17.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。
  結(jié)果:治療前,模型組和治療組AR癥狀評分均大于5,治

3、療后,A治療組AR癥狀評分小于5。A空白組、A模型組、A治療組、B空白組、B模型組和B治療組EOS數(shù)分別為0.78±0.31、21.60±2.90、10.43±2.56、0.83±0.46、22.44±3.39和23.40±4.24,A治療組EOS數(shù)較A模型組明顯減少,差異具有顯著性(t=7.08,P<0.05),B治療組EOS數(shù)與B模型組比較,差異無顯著性(t=0.71,P>0.05);空白組OVA-sIgE的表達為陰性,其余組為陽性

4、;各組IFN-γ與IL-4比值分別為10.75±3.38、10.38±3.08、3.02±0.69、2.71±0.89、2.52±0.30和5.45±1.41,A治療組IFN-γ與IL-4比值較A模型組明顯升高,差異具有顯著性意義(t=5.08 P<0.05),B治療組IFN-γ與IL-4比值與B模型組比較,差異無顯著性(t=1.60,P>0.05)。
  結(jié)論:腹股溝皮下注射免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎效果好,周期短,操作簡單,可行性

5、好,是特異性免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎的一種新方法。
  第二部分:變應(yīng)性鼻炎特異性免疫治療前后鼻黏膜microRNA的變化研究。
  目的:研究microRNA在變應(yīng)性鼻炎特異性免疫治療前后表達的變化。
  方法:雌性BALB/c小鼠,6~8周齡,隨機分為對照組、模型組和治療組。采用卵清蛋白腹腔注射及滴鼻法建立AR小鼠模型,以腹股溝皮下注射法進行SIT,以疊加法進行行為學(xué)評分,鼻黏膜嗜酸性粒細胞計數(shù),酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測

6、血清中特異性O(shè)VA-slgE的表達及鼻腔灌洗液中IFN-γ與IL-4的表達。3組小鼠分別用microRNA基因芯片進行初步篩查,篩查治療組與模型組相比Fold change≥2.0且P<0.05的microRNA,而后用GeneSpring12.5軟件進行靶基因預(yù)測并與免疫反應(yīng)和炎癥相關(guān)通路中的mRNA取交集。用MEV_4_6_0軟件做聚類分析圖、Cytoscape_v2.8.2做靶基因網(wǎng)絡(luò)圖。
  結(jié)果:AR小鼠模型及SIT成功

7、。治療組與模型組相比有9個microRNA表達下調(diào),6個microRNA表達上調(diào)。聚類分析可明顯看出治療組和模型組分別聚在兩個分支。這15個microRNA的靶基因有5753個,取交集后得到451個與SIT相關(guān)性更大的靶基因。從網(wǎng)絡(luò)圖看出,一個microRNA可以調(diào)控多個靶基因,一個基因也可以受多個microRNA的調(diào)控,它們相互作用可能參與了SIT的機制。
  結(jié)論:鼻黏膜microRNA的表達在AR的SIT前后發(fā)生了變化,mi

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