墓頭回抗腫瘤有效部位的篩選及其作用機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的:篩選墓頭回抗癌有效部位并初步探討其抗腫瘤機(jī)制。方法:將墓頭回粗粉進(jìn)行熱回流提取，采用吸附柱層析等色譜法進(jìn)行分離、純化粗提物及用紅外光譜法和核磁共振波譜法鑒定化合物結(jié)構(gòu)，采用細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)篩選活性部位，用吉姆薩(Giemsa)染色法觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)變化，MTT法檢測墓頭回提取物對細(xì)胞的增殖抑制作用，流式細(xì)胞儀(FCM)檢測細(xì)胞凋亡，免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法觀察凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:(1)分離得到三個單體，主要為齊墩果

2、酸；得到一個活性較強(qiáng)的部位為5％乙醇-水洗脫組分。(2)墓頭回不同濃度組對細(xì)胞的增殖活力有顯著的抑制作用，與相應(yīng)對照組比較有顯著性差異(p＜0.05)；其抑制作用隨劑量增加而增加。(3)在倒置相差顯微鏡下，觀察用吉姆薩(Giemsa)染色后細(xì)胞凋亡的形態(tài)：細(xì)胞核染色質(zhì)固縮、碎裂、染色較深，細(xì)胞膜褶皺、卷曲，出芽形成凋亡小體。(4)流式細(xì)胞儀(FCM)檢測結(jié)果表明，墓頭回提取物可增加G0/G1期細(xì)胞，減少S、G2/M期細(xì)胞數(shù)量，細(xì)胞增殖指

3、數(shù)(PI)降低，尤其以72h組變化最為明顯(p＜0.05)。(5)K562細(xì)胞經(jīng)藥物48h作用后，Bax蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，表現(xiàn)為陽性細(xì)胞增多且隨時間著色逐漸加深，與空白組比較有顯著差異(p＜0.05)。 結(jié)論:1.墓頭回提取物對慢性白血病細(xì)胞K562體外生長有明顯的抑制作用，其機(jī)理可能與細(xì)胞的G1期阻滯有關(guān)。 2.墓頭回提取物可誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡，其機(jī)理可能為通過上調(diào)Bax蛋白的表達(dá)，從而啟動凋亡級聯(lián)反應(yīng)。 3