苦瓜提取物體外抗腫瘤活性部位的篩選及作用機制研究.pdf

1、目的:本文通過研究苦瓜不同溶劑提取部位的抗腫瘤活性，篩選出有效部位，并分析活性部位的化學(xué)成分，旨在采用體外藥理實驗聯(lián)合RT-PCR實驗與流式細胞技術(shù)對苦瓜抗腫瘤的作用機理進行初步研究。
　　苦瓜，又可稱為涼瓜，為葫蘆科植物，是一年生攀緣草本。含有多種生物活性成分，具有抗腫瘤、抗病毒、降血糖、抗生育、抗氧化、抑菌等作用。《本草綱目》就稱:苦瓜“苦寒、無毒、除邪熱、解勞乏、清心明目、益氣壯陽?！笨喙暇哂薪笛恰⒖咕?、消炎、抗病毒、提高

2、機體免疫力及墮胎、抗生育等作用，國內(nèi)外學(xué)者也多次報道了這方面的研究，而且特別是對苦瓜在防腫瘤方面所起的作用更為關(guān)注。本實驗主要研究苦瓜不同提取物體外抗腫瘤作用并初步探討其作用機理，具體工作包括以下內(nèi)容:
　　方法:1苦瓜提取物的制備:采用大孔吸附柱色譜法，依次采用水、20％、40％、60％、80％甲醇對苦瓜醇提物進行洗脫，得到苦瓜5種不同濃度溶劑的提取物。
　　2苦瓜活性部位的篩選:本文選用體外培養(yǎng)的人胃癌細胞MGC-803

3、為實驗?zāi)Ｐ?，以半?shù)致死率為評定指標(biāo)，采用MTT實驗研究上述5種苦瓜不同溶劑提取物對MGC-803細胞的生長抑制作用。
　　3當(dāng)選定苦瓜提取物最佳抗腫瘤活性部位后，配制不同濃度的苦瓜抗腫瘤活性部位溶液，繼續(xù)采用MTT實驗，探索苦瓜抗腫瘤活性部位的最低有效濃度。
　　4采用RT-PCR實驗，研究苦瓜80％甲醇提取部位不同濃度給藥時MGC-803相關(guān)基因P53、Bax與Bcl-2相對表達量。
　　5運用流式細胞技術(shù)研究不同濃

4、度苦瓜80％甲醇提取部位對人胃癌細胞MGC-803細胞周期的分布的影響。
　　結(jié)果:1 MTT實驗表明，苦瓜60％、80％甲醇提取部位抗腫瘤效果最佳，其中，80％甲醇提取部位抗腫瘤效果更優(yōu)。在24h時對人胃癌細胞MGC-803的抑制率已超過50％，達到半數(shù)致死作用。且當(dāng)苦瓜80％甲醇提取部位給藥濃度達到75μg/ml時，其抗腫瘤效果最佳。
　　2 RT-PCR實驗結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)給藥濃度為50μg/ml、75μg/

5、ml時能顯著下調(diào)Bcl-2的相對表達，上調(diào)P53、Bax的相對表達。同時給藥濃度為75μg/ml時，與DMSO對照組比較，人胃癌細胞MGC-803相關(guān)基因P53、Bax與Bcl-2表達具有極顯著差異。而當(dāng)給藥濃度為25μg/ml時，與對照組比較，P53、Bax和Bcl-2基因的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3流式細胞技術(shù)實驗結(jié)果顯示，當(dāng)給藥濃度分別為0、25、50、75μg/ml時，人胃癌細胞MGC-803凋亡細胞(LR)/壞死細胞