WSSV的感染、高效檢測(cè)及生物信息學(xué)分析.pdf

1、對(duì)蝦白斑綜合征的病原為一種無(wú)包埋體的類桿狀病毒，此病毒被命名為白斑綜合征病毒(Whitespotsyndromevirus，WSSV)。該病感染率和致死率都極高，而且宿主域廣泛，給養(yǎng)蝦業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 本研究首先利用患WSSV的克氏螯蝦的病料，通過(guò)回感健康螯蝦，建立了穩(wěn)定的白斑綜合征病毒回感體系；并根據(jù)公布的WSSV的基因組序列(GenBank登錄號(hào)為AF332093)設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增出其中的一個(gè)未知基因序列WS

2、SVORF332，序列分析結(jié)果顯示，該序列與GenBank中WSSV基因庫(kù)中相應(yīng)序列同源性達(dá)到98％，確認(rèn)為克氏螯蝦WSSV的基因片段：另外通過(guò)PCR方法檢測(cè)了羅氏沼蝦的WSSV，結(jié)果表明羅氏沼蝦也是WSSV的天然宿主；將羅氏沼蝦WSSVORF234克隆后，在原核系統(tǒng)中進(jìn)行了表達(dá)，以SDS—PAGE及WestemBlot檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物，結(jié)果顯示ORF234可以正確表達(dá)為蛋白質(zhì)，而在克氏螯蝦WSSV中也能擴(kuò)增出與羅氏沼蝦WSSVORF234

3、相似的特異性條帶。 由于WSSV危害極大，宿主域廣泛，準(zhǔn)確而靈敏地診斷WSSV對(duì)于養(yǎng)殖生產(chǎn)有著積極的意義。本研究通過(guò)對(duì)WSSV基因組中的兩個(gè)ORF區(qū)域進(jìn)行了序列分析，分別設(shè)計(jì)了二套用于LAMP特異性擴(kuò)增的引物，研究結(jié)果顯示，該二套引物均能準(zhǔn)確擴(kuò)增出預(yù)期條帶，溫度是影響擴(kuò)增結(jié)果的重要因素。其中對(duì)ORF234片段擴(kuò)增，LAMP的靈敏度比PCR擴(kuò)增要高出近萬(wàn)倍，且不具有假陽(yáng)性，擴(kuò)增可以在1.5h內(nèi)完成，具時(shí)間省、靈敏度高、無(wú)假陽(yáng)性、所