吡格列酮對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠脊髓和腓神經(jīng)免疫損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：糖尿病神經(jīng)病變(diabeticneuropathy，DN)是糖尿病常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥之一，隨著糖尿病(diabetesmellitus，DM)發(fā)病率的增高，DN對(duì)健康的危害性日益明顯。目前，對(duì)DN的預(yù)防和治療主要以控制血糖和對(duì)癥治療為主，但療效欠佳。因此對(duì)其病因及其發(fā)病機(jī)制的深入研究將有助于我們有效地干預(yù)DN的發(fā)生和發(fā)展。我們?cè)谂R床工作中，對(duì)部分2型糖尿病患者進(jìn)行的皮膚活檢、腎活檢和骨骼肌活檢發(fā)現(xiàn)，以上器官有多種免疫復(fù)合物沉積，提

2、示免疫因素參與了DM及其慢性并發(fā)癥的發(fā)病過(guò)程。在隨后完成的系列研究中，我們發(fā)現(xiàn)在鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的DM大鼠的脊髓、背根神經(jīng)節(jié)和坐骨神經(jīng)均存在免疫和炎癥反應(yīng)的激活，應(yīng)用環(huán)孢菌素A(CsA)可明顯延緩病變，保護(hù)組織。
　　吡格列酮是噻唑烷二酮類藥物(Thiazolidinediones，TZDs)，目前作為胰島素增敏劑廣泛應(yīng)用于臨床。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，TZDs藥物還具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用。本實(shí)驗(yàn)擬進(jìn)一步研究STZ誘導(dǎo)的DM大鼠

3、模型脊髓和腓神經(jīng)的病理改變、發(fā)病機(jī)制以及吡格列酮的干預(yù)作用，為DN的臨床治療提供新的思路。
　　方法：96只雄性SD大鼠，隨機(jī)抽取12只大鼠作為正常對(duì)照組(CON組)，其余84只以靜脈注射STZ的方法制造DM大鼠模型。所有成模大鼠根據(jù)血糖水平分層后，隨機(jī)分為PIO小劑量治療組(PioL組，4mg/kg/d)、PIO大劑量治療組(PioH組，20mg/kg/d)、PIO聯(lián)合甘精胰島素治療組(PiI組，PIO4mg/kg/d+甘精胰島

4、素4U//kg/d)、CsA治療組(CsA組，1mg/kg/d)、CsA聯(lián)合甘精胰島素治療組(CsI組CsA1mg/kg/d+甘精胰島素4U//kg/d)、甘精胰島素治療組(Ins組，4U//kg/d)、DM未治療組(DM組)。PIO配置成混懸液后予以灌胃，CsA溶于橄欖油后予以皮下注射，甘精胰島素予以皮下注射。成模16周后處死。留取血、尿標(biāo)本分別檢測(cè)肝腎功能、血糖和胰島素水平。HE染色光鏡下觀察各組大鼠脊髓和腓神經(jīng)的組織學(xué)病理改變，通

5、過(guò)免疫組化和免疫熒光方法檢測(cè)上述器官I(mǎi)gG、IgA和IgM的沉積。采用免疫組化方法觀察炎癥因子TNFα及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路NF-κB和p-p38MAPK蛋白在各組大鼠脊髓和腓神經(jīng)的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.STZ以45mg/kg的劑量靜脈注射后，檢測(cè)大鼠血糖大于16.7mmol/l，確定造模成功。2.造模16周后單用PIO或CSA干預(yù)組大鼠血糖較DM組血糖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)，表明其干預(yù)作用不依賴于血糖水平。3.各PIO和CS

6、A干預(yù)組大鼠ALT、AST、TBIL水平與CON組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)，各PIO和CSA干預(yù)組大鼠血清ALB、BUN、Cr水平較DM組顯著改善，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。4.造模后16周，HE染色見(jiàn)DM各組大鼠脊髓無(wú)明顯形態(tài)學(xué)改變；而腓神經(jīng)出現(xiàn)軸突變細(xì)、髓鞘腫脹、神經(jīng)血管周?chē)馨图?xì)胞浸潤(rùn)的改變，各PIO和CSA干預(yù)組形態(tài)學(xué)損傷減輕，PioH組的損傷減輕程度接近CSA組。5.造模16周，DM組大鼠脊髓和腓神經(jīng)可見(jiàn)IgG、I

7、gA、IgM異常沉積，各PIO和CsA干預(yù)組大鼠脊髓和腓神經(jīng)免疫球蛋白的沉積不同程度減少，以CsI組最明顯，CSA組次之，PioH組改善情況接近CSA組，IOD值分析兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。6.DM組大鼠脊髓和腓神經(jīng)TNF-α、NF-κB和p-p38MAPK蛋白表達(dá)較CON組均明顯增加，各PIO和CsA治療組大鼠以上各項(xiàng)指標(biāo)的組織表達(dá)水平不同程度降低，以CsI組最明顯，CSA組次之，PioH組降低至接近CSA組水平，IOD值分

8、析兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。
　　結(jié)論：1.靜脈注射45mg/kg的STZ，可成功制備糖尿病大鼠模型。2.成模16周，STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠脊髓和腓神經(jīng)出現(xiàn)免疫球蛋白的異常沉積，及其下游炎癥通道的激活，提示免疫因素參與了DN的發(fā)病。3.應(yīng)用CsA進(jìn)行干預(yù)治療能有效減少脊髓和腓神經(jīng)免疫球蛋白的異常沉積、抑制炎癥通道激活，保護(hù)靶組織免受免疫損傷，大劑量PIO具有類似于CSA的保護(hù)作用。4.PIO和CSA的干預(yù)作用不依賴于血糖水