TGF-β1在脊髓空洞前狀態(tài)的表達(dá)變化.pdf

1、目的：脊髓空洞癥(Syringomyelia，SM)是神經(jīng)外科領(lǐng)域中一種常見的慢性退行性疾病，起病隱匿、進(jìn)展緩慢，以脊髓內(nèi)含有液體空洞形成及膠質(zhì)增生為病理特點。臨床表現(xiàn)為受累脊髓節(jié)段不同程度的分離性感覺障礙、下運動神經(jīng)元功能障礙、長傳導(dǎo)束功能障礙和營養(yǎng)障礙，重者常因頑固性疼痛、肢體活動障礙而喪失工作能力或生活不能自理。本病病因尚不完全明了，與顱頸接合部畸形如小腦扁桃體下疝畸形、產(chǎn)傷、脊髓損傷、炎癥等多種因素有關(guān)。目前，藥物治療無明顯療效

2、，后顱窩減壓和或空洞引流術(shù)雖對某些病例癥狀有部分緩解作用，但長期療效不明確，故其治療頗為棘手。尤其是近年來隨著MRI的廣泛應(yīng)用，其發(fā)現(xiàn)率有逐漸增高的趨勢。因此，對脊髓空洞癥的防治研究須進(jìn)一步加強(qiáng)。 我們以往的研究發(fā)現(xiàn)Kaolin誘導(dǎo)的兔脊髓空洞癥在空洞形成前存在上頸髓缺血水腫，MRI呈現(xiàn)TW1低信號，TW2高信號且不能被FLAIR序列所抑制，稱之為空洞形成前期，國外稱之為脊髓空洞前狀態(tài)，此期大約在2周左右。如脊髓空洞前狀態(tài)進(jìn)一步

3、惡化即可形成空洞，空洞一旦形成則難以消除。也就是說，逆轉(zhuǎn)或改善脊髓空洞前狀態(tài)的缺血水腫程度是防止和減少脊髓空洞形成的關(guān)鍵所在。 轉(zhuǎn)移生長因子(transforminggrowthfactorbeta1，TGF-β1)是一種能調(diào)控細(xì)胞生長、分化、抑制細(xì)胞外基質(zhì)蛋白產(chǎn)生的生長因子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和腦膜、脈絡(luò)叢也有表達(dá)。近年來研究表明TGF-β1過度表達(dá)在先天性腦積水、蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦積水形成中發(fā)揮重要作用，但在脊髓空洞，尤其是在空

4、洞前狀態(tài)時表達(dá)變化還不清楚。 為此本研究擬通過枕大池注入Kaolin建立實驗性新西蘭白兔脊髓空洞癥模型，從不同時間點觀察脊髓空洞前狀態(tài)脊髓的TGF-β1動態(tài)表達(dá)變化，應(yīng)用免疫組化技術(shù)對TGF-β1在脊髓空洞前狀態(tài)的表達(dá)進(jìn)行研究，為脊髓空洞癥的防治提供理論依據(jù)。 方法：將90只健康、體重1.5-2kg的新西蘭白兔(雌雄不限)，隨機(jī)分為三組。其中Kaolin組、生理鹽水組、對照組各30只。在氯胺酮(30mg/kg)耳緣靜脈麻

5、醉后，取俯臥頦低位，頸后部備皮常規(guī)消毒。按Mclaurin法行經(jīng)皮枕大池穿刺術(shù)，緩慢抽出無色透明腦脊液0.6ml后，Kaolin組動物注入37℃25％Kaolin懸濁0.6ml；依同樣方法生理鹽水組動物僅注入37℃生理鹽水0.6ml；對照組麻醉后既不作枕大池穿刺，也不作枕大池注射。于術(shù)后第1、3、7、10、14天，按改良的Tarlov評分方法對動物進(jìn)行行為學(xué)檢查記錄后，自各組中隨機(jī)選取6只動物再次麻醉下灌注處死，迅速完整取出腦和頸髓組織

6、，于C1-2節(jié)段取4mm，仔細(xì)剔出表面蛛網(wǎng)膜及Kaolin沉積，置4％多聚甲醛后固定48小時，供TGF-β1免疫組織化學(xué)染色檢查。用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)對TGF-β1陽性反應(yīng)物積分光密度值(IOD)進(jìn)行半定量檢測，數(shù)據(jù)通過t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計處理。 結(jié)果：術(shù)后不同時間點各組動物改良Tarlov評分(見Table1)：對照組動物評分在各時間點為4，生理鹽水組動物評分在各時間點也為4，二者之間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(

7、t檢驗P＞0.05)，Kaolin組動物，在第7、10、14天評分明顯下降，分別為：2.5±0.36、2.3±0.22、1.7±0.24、與對照組和生理鹽水組動物相比有統(tǒng)計學(xué)差異(t檢驗P＜0.05)。標(biāo)本肉眼觀察：對照組動物和生理鹽水組動物在各時間點腦，脊髓、蛛網(wǎng)膜下腔和中央管等外觀正常。Kaolin組動物的腦脊髓標(biāo)本在第1天無明顯變化，僅見下位腦干到上頸髓背、腹側(cè)蛛網(wǎng)膜下腔有大量Kaolin沉積，第四腦室正中孔和側(cè)孔被不同程度阻塞；

8、第3天除上述變化外，出現(xiàn)腦組織腫脹、脊髓水腫增粗；第7、10天水腫最為明顯，枕大池狹窄或閉塞，第四腦室輕度擴(kuò)張；第14天，脊髓水腫稍有減輕，但第四腦室擴(kuò)張較前明顯，中央管飽滿。Kaolin肉芽腫與蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓粘連。TGF-β1免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，對照組和生理鹽水組動物頸髓灰質(zhì)和白質(zhì)神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞均有弱陽性表達(dá)。Kaolin組動物于術(shù)后第1天上頸髓組織神經(jīng)元表達(dá)有明顯升高，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞亦可見陽性表達(dá)，主要為胞漿表達(dá)；第3天、7天、

9、10天在上頸髓灰質(zhì)及白質(zhì)神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞呈強(qiáng)陽性表達(dá)，胞漿可見粗的棕黃色顆分布，以第10天最為顯著。第14天則TGF-β1表達(dá)稍微減弱。生理鹽水組和對照組TGF-β1表達(dá)的IOD(IntegralOpticalDensity)測定無明顯差異(t檢驗P＞0.05)；Kaolin組動物頸髓組織中TGF-β1表達(dá)與生理鹽水組和對照組相比明顯升高，其中以第10天最為顯著(t檢驗，P＜0.01)。 結(jié)論：本實驗結(jié)果顯示在脊髓空洞形成早