TGF-β1在脊髓空洞前狀態(tài)的表達(dá)變化.pdf

1、目的：脊髓空洞癥(Syringomyelia，SM)是神經(jīng)外科領(lǐng)域中一種常見(jiàn)的慢性退行性疾病，起病隱匿、進(jìn)展緩慢，以脊髓內(nèi)含有液體空洞形成及膠質(zhì)增生為病理特點(diǎn)。臨床表現(xiàn)為受累脊髓節(jié)段不同程度的分離性感覺(jué)障礙、下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元功能障礙、長(zhǎng)傳導(dǎo)束功能障礙和營(yíng)養(yǎng)障礙，重者常因頑固性疼痛、肢體活動(dòng)障礙而喪失工作能力或生活不能自理。本病病因尚不完全明了，與顱頸接合部畸形如小腦扁桃體下疝畸形、產(chǎn)傷、脊髓損傷、炎癥等多種因素有關(guān)。目前，藥物治療無(wú)明顯療效

2、，后顱窩減壓和或空洞引流術(shù)雖對(duì)某些病例癥狀有部分緩解作用，但長(zhǎng)期療效不明確，故其治療頗為棘手。尤其是近年來(lái)隨著MRI的廣泛應(yīng)用，其發(fā)現(xiàn)率有逐漸增高的趨勢(shì)。因此，對(duì)脊髓空洞癥的防治研究須進(jìn)一步加強(qiáng)。 我們以往的研究發(fā)現(xiàn)Kaolin誘導(dǎo)的兔脊髓空洞癥在空洞形成前存在上頸髓缺血水腫，MRI呈現(xiàn)TW1低信號(hào)，TW2高信號(hào)且不能被FLAIR序列所抑制，稱之為空洞形成前期，國(guó)外稱之為脊髓空洞前狀態(tài)，此期大約在2周左右。如脊髓空洞前狀態(tài)進(jìn)一步

3、惡化即可形成空洞，空洞一旦形成則難以消除。也就是說(shuō)，逆轉(zhuǎn)或改善脊髓空洞前狀態(tài)的缺血水腫程度是防止和減少脊髓空洞形成的關(guān)鍵所在。 轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子(transforminggrowthfactorbeta1，TGF-β1)是一種能調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、抑制細(xì)胞外基質(zhì)蛋白產(chǎn)生的生長(zhǎng)因子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和腦膜、脈絡(luò)叢也有表達(dá)。近年來(lái)研究表明TGF-β1過(guò)度表達(dá)在先天性腦積水、蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦積水形成中發(fā)揮重要作用，但在脊髓空洞，尤其是在空

4、洞前狀態(tài)時(shí)表達(dá)變化還不清楚。 為此本研究擬通過(guò)枕大池注入Kaolin建立實(shí)驗(yàn)性新西蘭白兔脊髓空洞癥模型，從不同時(shí)間點(diǎn)觀察脊髓空洞前狀態(tài)脊髓的TGF-β1動(dòng)態(tài)表達(dá)變化，應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)TGF-β1在脊髓空洞前狀態(tài)的表達(dá)進(jìn)行研究，為脊髓空洞癥的防治提供理論依據(jù)。 方法：將90只健康、體重1.5-2kg的新西蘭白兔(雌雄不限)，隨機(jī)分為三組。其中Kaolin組、生理鹽水組、對(duì)照組各30只。在氯胺酮(30mg/kg)耳緣靜脈麻

5、醉后，取俯臥頦低位，頸后部備皮常規(guī)消毒。按Mclaurin法行經(jīng)皮枕大池穿刺術(shù)，緩慢抽出無(wú)色透明腦脊液0.6ml后，Kaolin組動(dòng)物注入37℃25％Kaolin懸濁0.6ml；依同樣方法生理鹽水組動(dòng)物僅注入37℃生理鹽水0.6ml；對(duì)照組麻醉后既不作枕大池穿刺，也不作枕大池注射。于術(shù)后第1、3、7、10、14天，按改良的Tarlov評(píng)分方法對(duì)動(dòng)物進(jìn)行行為學(xué)檢查記錄后，自各組中隨機(jī)選取6只動(dòng)物再次麻醉下灌注處死，迅速完整取出腦和頸髓組織

6、，于C1-2節(jié)段取4mm，仔細(xì)剔出表面蛛網(wǎng)膜及Kaolin沉積，置4％多聚甲醛后固定48小時(shí)，供TGF-β1免疫組織化學(xué)染色檢查。用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)對(duì)TGF-β1陽(yáng)性反應(yīng)物積分光密度值(IOD)進(jìn)行半定量檢測(cè)，數(shù)據(jù)通過(guò)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。 結(jié)果：術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)各組動(dòng)物改良Tarlov評(píng)分(見(jiàn)Table1)：對(duì)照組動(dòng)物評(píng)分在各時(shí)間點(diǎn)為4，生理鹽水組動(dòng)物評(píng)分在各時(shí)間點(diǎn)也為4，二者之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(

7、t檢驗(yàn)P＞0.05)，Kaolin組動(dòng)物，在第7、10、14天評(píng)分明顯下降，分別為：2.5±0.36、2.3±0.22、1.7±0.24、與對(duì)照組和生理鹽水組動(dòng)物相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t檢驗(yàn)P＜0.05)。標(biāo)本肉眼觀察：對(duì)照組動(dòng)物和生理鹽水組動(dòng)物在各時(shí)間點(diǎn)腦，脊髓、蛛網(wǎng)膜下腔和中央管等外觀正常。Kaolin組動(dòng)物的腦脊髓標(biāo)本在第1天無(wú)明顯變化，僅見(jiàn)下位腦干到上頸髓背、腹側(cè)蛛網(wǎng)膜下腔有大量Kaolin沉積，第四腦室正中孔和側(cè)孔被不同程度阻塞；

8、第3天除上述變化外，出現(xiàn)腦組織腫脹、脊髓水腫增粗；第7、10天水腫最為明顯，枕大池狹窄或閉塞，第四腦室輕度擴(kuò)張；第14天，脊髓水腫稍有減輕，但第四腦室擴(kuò)張較前明顯，中央管飽滿。Kaolin肉芽腫與蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓粘連。TGF-β1免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組和生理鹽水組動(dòng)物頸髓灰質(zhì)和白質(zhì)神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞均有弱陽(yáng)性表達(dá)。Kaolin組動(dòng)物于術(shù)后第1天上頸髓組織神經(jīng)元表達(dá)有明顯升高，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞亦可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，主要為胞漿表達(dá)；第3天、7天、

9、10天在上頸髓灰質(zhì)及白質(zhì)神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，胞漿可見(jiàn)粗的棕黃色顆分布，以第10天最為顯著。第14天則TGF-β1表達(dá)稍微減弱。生理鹽水組和對(duì)照組TGF-β1表達(dá)的IOD(IntegralOpticalDensity)測(cè)定無(wú)明顯差異(t檢驗(yàn)P＞0.05)；Kaolin組動(dòng)物頸髓組織中TGF-β1表達(dá)與生理鹽水組和對(duì)照組相比明顯升高，其中以第10天最為顯著(t檢驗(yàn)，P＜0.01)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在脊髓空洞形成早