桑毛色二孢根腐病的病原、發(fā)生規(guī)律及其防治研究.pdf

1、由可可毛色二孢侵染桑樹引起的根腐病是我國桑樹生產(chǎn)上的一種新病害，為有效防控該桑樹根腐病，本文對該病的病原鑒定、病原菌遺傳多樣性、光照對病原菌生長的影響、病害發(fā)生規(guī)律及防治等方面進(jìn)行了研究，得出如下主要結(jié)果:
　　1、從發(fā)病地采集的870個(gè)桑樹病根組織塊中分離出12種真菌，分離率以菌株XY14為最高，達(dá)90％。根據(jù)致病性測定、致病菌形態(tài)特征觀察和基于rDNA-ITS和EF1-α序列測定分析等結(jié)果，將XY14鑒定為可可毛色二孢菌(La

2、siodiplodiatheobromae(Pat.) Griffon&Maubl.)。由可可毛色二孢菌引起的桑樹根腐病首次在中國發(fā)現(xiàn)。
　　2、通過比較桑毛色二孢根腐病菌在光照和黑暗培養(yǎng)條件下的菌落生長速度和分生孢子萌發(fā)情況，發(fā)現(xiàn)光照和黑暗對桑毛色二孢根腐病菌的菌絲生長和分生孢子萌發(fā)沒有顯著影響。持續(xù)光照有利于L.theobromae分生孢子器和分生孢子的產(chǎn)生。光照培養(yǎng)兩天后，PDA平板上即出現(xiàn)子座芽點(diǎn)，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，子座

3、逐漸增大增粗。
　　3、本文利用RAPD和ISSR兩種分子標(biāo)記技術(shù)分析了不同地理和寄主來源的29個(gè)可可毛色二孢菌株的遺傳多樣性。其中23株菌株是來自廣西橫縣、宜州、鹿寨、象州的桑毛色二孢根腐病菌菌株，6株來自廣西武鳴縣劍麻葉斑病菌（Lasiodiplodiatheobromae）菌株。兩種分子標(biāo)記結(jié)果顯示，參試菌株的平均多態(tài)率均在93％以上。RAPD分子標(biāo)記的菌株遺傳相似系數(shù)范圍為0.61-0.92，而ISSR分子標(biāo)記的菌株遺傳相

4、似系數(shù)在0.69-0.99之間。利用NTSYSpc軟件(Version2.10e)分別構(gòu)建RAPD標(biāo)記和ISSR標(biāo)記的UPGMA系統(tǒng)聚類圖。RAPD標(biāo)記的UPGMA聚類圖將29個(gè)菌株分為7個(gè)類群（遺傳相似系數(shù)為0.76時(shí)）;ISSR標(biāo)記的UPGMA聚類圖將參試菌株劃分為5個(gè)類群（遺傳相似系數(shù)為0.746時(shí)）。RAPD類群和ISSR類群均與菌株的地理來源有相關(guān)性。兩種分子標(biāo)記的結(jié)果均反映出不同居群間遺傳一致度較高，遺傳距離較短。
　

5、　4、病害調(diào)查結(jié)果顯示，桑毛色二孢根腐病的發(fā)病率和嚴(yán)重度與桑樹樹齡、根結(jié)線蟲為害及桑樹品種有關(guān)。不論是幼年桑樹，還是成年桑樹，均可發(fā)生根腐病，但樹齡越大，發(fā)病越嚴(yán)重。幾乎所有根腐病為害的桑樹根部均有根結(jié)線蟲的癭瘤（根結(jié)）存在，但是部分有根結(jié)線蟲為害的桑樹，沒有表現(xiàn)根腐病癥狀。本研究調(diào)查了廣西橫縣、宜州市、象州縣和鹿寨縣共11個(gè)桑樹品種4-6年樹齡的桑毛色二孢根腐病發(fā)生情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)品種沙2×109的發(fā)病率最高，品種抗青283的發(fā)病率最低

6、。
　　5、研究了哈茨木霉（Trichoderma harzianum）GZ-5、深綠木霉（T.atroviride）ST-1、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）B11、解淀粉芽孢桿菌（B.amyloliquefaciens）YZ14-3和一株寡雄腐霉（Pythium oligandrum）對L.theobromae的拮抗作用。結(jié)果表明，五種生防菌株均能有效抑制L.theobromae的菌絲生長。其中，P.olig

7、andrum、 B11和YZ14-3對L.theobromae菌絲生長的抑制率分別為88.89％、75％和73.3％。兩株木霉菌株對L.theobromae菌絲生長的拮抗系數(shù)級別均為Ⅲ級。顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，P.oligandrum和木霉菌絲緊緊纏繞L.theobromae菌絲并致使L.theobromae菌絲畸形、膨大;兩株芽孢桿菌可引起L.theobromae菌絲內(nèi)含物泡狀化、菌絲畸形膨大、易斷裂。L.theobromae的分生孢子在

8、P.oligandrum、深綠木霉和哈茨木霉培養(yǎng)液中的萌發(fā)率低，分別為6％、20.4％和12.2％;在兩株芽孢桿菌的培養(yǎng)液中不僅不能萌發(fā)，而且分生孢子因細(xì)胞壁降解而解體。
　　6、研究了9個(gè)劍麻品種的新鮮葉汁、腐熟葉汁、煮沸葉汁和滅菌葉汁對L.theobromae菌絲生長和分生孢子萌發(fā)的影響。結(jié)果表明，參試各劍麻品種的葉片汁液均能不同程度地抑制L.theobromae的菌絲生長，抑菌率范圍為63.4-100％，抑菌率因劍麻品種和處

9、理方式而有差異。參試的九個(gè)品種中，以76416麻和無刺番麻葉汁的抑菌效果最好，76416麻和無刺番麻能完全抑制L.theobromae菌絲生長，其抑菌率均為100％;其次為藍(lán)劍麻，其四種處理的抑菌率為97.6％。其余6個(gè)劍麻品種的新鮮葉汁經(jīng)過腐熟、煮沸和滅菌后，其抑菌活性有所下降。顯微鏡下觀察各葉汁處理下的菌絲形態(tài)，發(fā)現(xiàn)L.theobromae菌絲畸形膨大、斷裂并發(fā)生原生質(zhì)滲漏。孢子萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果表明，除藍(lán)劍麻、H.11648和假菠蘿麻外

10、，其余6個(gè)品種四種處理的葉汁均能完全抑制L.theobromae分生孢子萌發(fā)。L.theobromae分生孢子在藍(lán)劍麻、H.11648和假菠蘿麻四種處理葉汁中的平均萌發(fā)率分別為72.4％、16.6％和13％。
　　7、50％多菌靈WP、70％甲基托布津WP、根腐寧WP、10％世高水分散粒劑和80％代森錳鋅WP對L.theobromae菌絲生長的室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，5種藥劑的EC50值分別為:0.079μg/mL、0.789μg/

11、mL、0.156μg/mL、0.165μg/mL和42.463μg/mL。L.theobromae的分生孢子在以上5種藥劑EC50下的萌發(fā)率分別為:17％、37.8％、6.8％、86％和28％。
　　8、選用哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、寡雄腐霉(Pythium oligandrum)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)、H.11648麻新鮮葉汁、世高、50％多菌靈WP

12、、70％甲基托布津WP、根腐寧WP、80％代森錳鋅WP等進(jìn)行大田防治試驗(yàn)。結(jié)果表明，參試的五種化學(xué)殺菌劑中，以根腐寧WP的防治效果最好(83.02％)，其次為50％多菌靈WP，其防治效果為80.9％。參試的四種生防菌劑中，以T.harzianum GZ-5的防治效果最好(75.62％)，其次為H.11648麻新鮮葉汁，防治效果為74.02％，防治效果顯著高于70％甲基托布津WP、80％代森錳鋅WP和世高等化學(xué)藥劑。因此，生產(chǎn)上可利用根腐