EFFECT OF BAMBOO LEAF FLAVONOID AND PHYTIC ACID ON THE CONTROL EFFICACY OF Pichia caribbica AGAINST Penicillium expansum AND PA.pdf

1、根據(jù)流行病學(xué)的研究證據(jù)表明，多吃水果和蔬菜可以有效降低慢性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。蘋果富含多種營(yíng)養(yǎng)成分，食用蘋果可以降低癌癥、心血管疾病、哮喘和糖尿病等疾病的患病風(fēng)險(xiǎn)。為了保證全年都有新鮮的蘋果，我們必須在采摘后進(jìn)行妥善的儲(chǔ)存。由于蘋果采后的自然環(huán)境是復(fù)雜的，因此很難確保蘋果在儲(chǔ)藏期間的質(zhì)量和安全。水果在采后易感染多種病菌，這在全世界范圍內(nèi)造成了重大的損失，同時(shí)也減緩了食品安全的進(jìn)程。通常情況下，真菌感染后會(huì)產(chǎn)生真菌毒素而污染食品，如擴(kuò)展青霉是蘋果

2、儲(chǔ)藏期易感染的主要病原菌，其可以產(chǎn)生展青霉素。展青霉素在不同的水果中均有發(fā)現(xiàn)，尤其在仁果類水果以及其衍生品中。食用展青霉素污染的水果及其制品會(huì)對(duì)青少年的健康產(chǎn)生嚴(yán)重的危害。因此，對(duì)水果采后擴(kuò)展青霉的控制就直接決定了儲(chǔ)藏期水果中展青霉素的累積。進(jìn)一步講，通過在水果貯藏期間降低擴(kuò)展青霉的侵染作用或者降解展青霉素都可以保證水果及其制品的新鮮和安全性。目前，主要通過冷藏和化學(xué)殺菌劑相結(jié)合的方法貯藏水果，但采用化學(xué)殺菌劑也面臨很多問題，比如技術(shù)方

3、面的，健康方面的以及病原菌的抗藥性等。然而，生物防治可以作為一種可供選擇的、可以減少人造化學(xué)殺菌劑使用的新型方法而展現(xiàn)出了良好的應(yīng)用前景。本課題的研究目的，通過添加一些外源性生物活性物質(zhì)來增強(qiáng)拮抗酵母（卡利比克畢赤酵母）的活性來控制蘋果上擴(kuò)展青霉的生長(zhǎng)，并抑制其產(chǎn)生展青霉素的能力。本文利用竹葉黃酮和植酸這兩種生物活性物質(zhì)與卡利比克畢赤酵母結(jié)合，通過蘋果體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)確定了竹葉黃酮和植酸結(jié)合卡利比克畢赤酵母時(shí)的最佳濃度。
　　結(jié)果表

4、明濃度為0.01％w/v的竹葉黃酮可以顯著(P＜0.05)抑制因擴(kuò)展青霉引起的傷口感染和腐爛直徑的擴(kuò)大。經(jīng)竹葉黃酮處理后，蘋果傷口處的酵母細(xì)胞數(shù)量比單獨(dú)處理或未處理組顯著增加。竹葉黃酮與拮抗酵母結(jié)合也顯著抑制整果的自然腐爛，在20℃貯存35天和4℃貯存15天生防效果分別達(dá)到96％和86％。
　　同樣，結(jié)合處理組與單獨(dú)應(yīng)用或未處理組相比，水果的品質(zhì)參數(shù):失重率(％)，硬度(N)和可溶性固形物（TSS）(％)都顯著減少。然而褐變度，可

5、滴定酸（TA）和抗壞血酸并沒有顯著差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為竹葉黃酮的采后生防應(yīng)用提供了有力的證據(jù)。因此，竹葉黃酮與卡利比克畢赤酵母結(jié)合使用為蘋果青霉病的防治提供了新方法，并且該方法將具有很大的應(yīng)用前景。
　　在蘋果傷口處檢測(cè)經(jīng)竹葉黃酮處理的卡利比克畢赤酵母和擴(kuò)展青霉之間相互作用的影響。在卡利比克畢赤酵母中添加竹葉黃酮與單獨(dú)處理和對(duì)照相比能提高抗氧化酶的活性，如過氧化物酶(POD)，多酚氧化酶(PPO)，超氧化物歧化酶(SOD)和β1，3葡

6、聚糖酶，然而過氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA)的活性受到抑制。結(jié)合處理與單獨(dú)處理和對(duì)照相比，結(jié)合處理能提高總酚類化合物(TPC)的活性。光學(xué)顯微鏡和掃描電子顯微鏡(SEM)的觀察結(jié)果表明:結(jié)合處理（卡利比克畢赤酵母中添加竹葉黃酮）可以使蘋果傷口處酵母細(xì)胞數(shù)量增加。結(jié)合處理和卡利比克畢赤酵母單獨(dú)使用均比竹葉黃酮單獨(dú)使用或?qū)φ战M對(duì)菌絲生長(zhǎng)有抑制作用，但結(jié)合處理的結(jié)果最好。結(jié)果表明酵母細(xì)胞對(duì)真菌菌絲生長(zhǎng)有抑制作用，在水果采后病害的管理過程

7、中，竹葉黃酮對(duì)拮抗酵母的生防效力起到一定重要作用。
　　本研究的另一目的是評(píng)估天然生物活性化合物的應(yīng)用前景，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)竹葉黃酮結(jié)合卡利比克畢赤酵母后能降低展青霉素的含量，抑制擴(kuò)展青霉產(chǎn)生的展青霉素。通過高相高效液相可以檢測(cè)于展青霉素的含量變化。在卡利比克畢赤酵母結(jié)合的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)其與竹葉黃酮結(jié)合更有效，結(jié)果顯示在結(jié)合防治蘋果青霉病害中（在20℃孵化后18天）其傷口擴(kuò)展緩慢，木質(zhì)素含量增加，pH值超過4.0，在病原菌潛伏期時(shí)間展青

8、霉素濃度很低。因此，竹葉黃酮作為植物生物活性化合物表現(xiàn)出與拮抗酵母菌結(jié)合有很好的優(yōu)勢(shì)。
　　對(duì)植酸與卡利比克畢赤酵母結(jié)合或作為單獨(dú)的使用在控制傷口感染和完整蘋果的腐敗進(jìn)行檢測(cè)?？ɡ瓤水叧嘟湍附Y(jié)合(0.2％v/v)植酸的共同防治對(duì)控制蘋果的擴(kuò)展青霉感染的效果比酵母或植酸單獨(dú)使用都有了明顯的改善。在(20℃，RH95％)的條件下經(jīng)過10天儲(chǔ)存后發(fā)現(xiàn)，發(fā)病率和水果的病斑直徑明顯低于對(duì)照組的水果?？ɡ瓤水叧嘟湍附Y(jié)合植酸處理能夠顯著降低

9、蘋果自然發(fā)病率，損失，褐變指數(shù)，同時(shí)可以保持蘋果的硬度，總酚類化合物、總可溶性固形物(TSS)和可滴定酸度(TA)。
　　同時(shí)，對(duì)(0.2％v/v)植酸影響卡利比克畢赤酵母對(duì)抑制擴(kuò)展青霉的增長(zhǎng)和防御機(jī)制進(jìn)行研究。在體外研究中擴(kuò)展青霉的增長(zhǎng)直接受到植酸的抑制。在水果傷口處，植酸結(jié)合酵母引起的防御反應(yīng)比單獨(dú)使用酵母或植酸的空白對(duì)照效果更為明顯。結(jié)合防治增加了過氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、過氧化氫酶(CAT)的酶活性和并減

10、少丙二醛(MDA)的量。
　　因此，植酸結(jié)合拮抗酵母處理激活水果的防御反應(yīng)機(jī)制以此構(gòu)成的基礎(chǔ)增加抵抗病原體感染在未來成為可能。
　　總而言之，對(duì)樣本采用持久性的綜合控制的方法是一個(gè)熱點(diǎn)。這表明，卡利比克畢赤酵母可以在傷口生長(zhǎng)以及經(jīng)受住環(huán)境變化的考驗(yàn)。因此，這些改進(jìn)有助于理解在水果采后的條件下拮抗劑的持久性的應(yīng)用，將導(dǎo)致時(shí)間上和規(guī)模化應(yīng)用的優(yōu)化，以及可以采用不同有效保護(hù)措施，同時(shí)也不可能無視對(duì)環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)這就表示在未來的研究中應(yīng)考