Ph-SA對(duì)金黃色葡萄球菌agr系統(tǒng)活性影響的初步研究.pdf

1、Ph-SA是本實(shí)驗(yàn)室以大腸菌素Ia和金黃色葡萄球菌的信息素AgrD1通過(guò)分子生物學(xué)方法構(gòu)建的多結(jié)構(gòu)域融合抗菌多肽。AgrD1可以將原本不能識(shí)別金黃色葡萄球菌的大腸菌素Ia引導(dǎo)至金黃色葡萄球菌胞膜的親疏水作用區(qū)內(nèi)，大腸菌素Ia的通道形成結(jié)構(gòu)域就可以循親疏水作用插入細(xì)菌胞膜，形成電壓依賴性的離子通道，將細(xì)菌殺死?！　grD是金黃色葡萄球菌密度閾值感應(yīng)系統(tǒng)(agr)的信號(hào)分子，當(dāng)其濃度達(dá)到一定的閾值，便會(huì)與金黃色葡萄球菌胞膜上的受體結(jié)合，

2、通過(guò)二元信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)啟動(dòng)基因的表達(dá)，促進(jìn)金黃色葡萄球菌大部分毒力因子的分泌，與金黃色葡萄球菌的致病性密切相關(guān)。Ph-SA是一個(gè)融合蛋白，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)相當(dāng)于將AgrD1序列的氨基端連接在大腸菌素Ia的羧基端，同天然的AgrD1相比，它對(duì)agr系統(tǒng)即金黃色葡萄球菌外毒素的分泌會(huì)產(chǎn)生怎樣的作用?對(duì)此我們進(jìn)行了初步觀察?！　?shí)驗(yàn)分緩沖液處理組、Ph-SA處理組和青霉素處理組，當(dāng)菌生長(zhǎng)液濁度(595nm處的光吸收值，A595)達(dá)到0.2時(shí)，加入相

3、應(yīng)的藥物，于不同的時(shí)間點(diǎn)分別采集樣品，通過(guò)高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)樣品中δ溶血素的分泌量，SDS-PAGE展示藥物作用后胞內(nèi)外蛋白分泌量的變化以及比色法檢測(cè)藥物作用后菌液上清溶血能力的變化，來(lái)比較Ph-SA對(duì)agr系統(tǒng)活性的影響?！　〗Y(jié)果表明：在同一時(shí)間點(diǎn)，Ph-SA處理組金黃色葡萄球菌δ溶血素分泌量要低于其它兩組；SDS-PAGE蛋白電泳譜顯示Ph-SA處理組多數(shù)的蛋白條帶濃度要低于其它兩組；同時(shí)Ph-SA處理組上清的溶血能力也