衰老對人和小鼠睪丸精子發(fā)生影響及其機制的研究.pdf

1、　　目的
　　探討衰老對人睪丸組織學結(jié)構(gòu)與精子發(fā)生的影響,以及生精細胞增殖與凋亡的變化,分析衰老過程精子發(fā)生衰減的機制；借助老年小鼠模型探討衰老對小鼠睪丸精子發(fā)生、附睪精子功能和受精的影響,為男性生殖衰老研究提供參考資料。
　　方法
　　1.老年人睪丸組織25例,根據(jù)年齡分為兩組,A組54-69歲(n=12)和B組70-88歲(n=13),以青年人睪丸組織(C組,n=8)作為對照組,應(yīng)用光鏡和透射電鏡觀察老年人睪丸組織

2、結(jié)構(gòu),光鏡下隨機選擇20個曲細精管橫截面,分別計數(shù)支持細胞和各級生精細胞的數(shù)目,分析精子發(fā)生狀況。應(yīng)用TdT介導的原位缺口末端標記技術(shù)(TUNEL)檢測睪丸生精細胞凋亡情況,應(yīng)用免疫組化方法測定生精細胞中增殖細胞核抗原(PCNA)的表達。
　　2.昆明系雄性小鼠,根據(jù)年齡分組：老年組為18月齡,對照組為6月齡,每組15只,分別取睪丸、附睪頭精子和附睪尾精子,觀察睪丸組織的增齡性變化,光鏡下隨機選擇20個曲細精管橫截面,分別計數(shù)支持

3、細胞和各級生精細胞的數(shù)目,分析精子發(fā)生狀況。檢測附睪頭和附睪尾的精子參數(shù)包括精子密度、存活率、活動率、正常形態(tài)率和胞漿小滴率,應(yīng)用體外受精和早期胚胎培養(yǎng)實驗評價老年小鼠精子受精能力和胚胎發(fā)育情況。
　　結(jié)果
　　1.老年人睪丸組織學顯示部分曲細精管萎縮,生精功能低下,生精阻滯常見,主要發(fā)生在精子細胞和初級精母細胞階段,可見未成熟生精細胞脫落到管腔。透射電鏡觀察到老年人曲細精管基膜增厚,支持細胞胞漿內(nèi)有明顯空泡,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)疏松,溶

4、酶體大而不規(guī)則,精子細胞染色質(zhì)呈粗顆粒狀,胞漿內(nèi)線粒體腫脹。
　　2.老年人睪丸精子發(fā)生的定量分析顯示老年A組和B組曲細精管橫截面內(nèi)暨南大學碩士學位論文衰老對人和小鼠翠丸精子發(fā)生影響及其機制的研究支持細胞平均數(shù)目均顯著低于C組(尸<；0.01),A組和B組精原細胞與支持細胞的比值與C組相比均無顯著差異(P>；0.05),B組初級精母細胞與支持細胞的比值低于C組(尸<；0.05),A組和B組球形精子細胞和延長精子細胞與支

5、持細胞的比值均低于C組(P<；0.001)。比較A組和B組各級生精細胞與支持細胞的比值,均未見顯著差異(羚0.05)。
　　3.老年人B組肇丸生精細胞增殖指數(shù)(PI)顯著低于C組和A組(尸<；0.01),B組翠丸生精細胞凋亡指數(shù)顯著高于C組(P<；0.01),老年A組增殖指數(shù)與凋亡指數(shù)的比值(Pl/Al)與C組的比較沒有顯著差異(P>；0.05),B組PI/AI顯著低于C組和A組(P<；0.01)。
　　

6、4.老年小鼠肇丸組織呈現(xiàn)部分曲細精管萎縮,生精功能低下。老年組曲細精管橫截面內(nèi),支持細胞數(shù)目與對照組的比較沒有顯著差異(尸>；0.05),精原細胞和初級精母細胞與支持細胞的比值與對照組比較均無顯著差異(尸>；0.05),球形精子細胞和延長精子細胞與支持細胞的比值均低于對照組(P<；0.01)。
　　5.老年小鼠附翠頭的精子密度、活動率和胞漿小滴率均顯著低于對照組 (P<；0.01),精子存活率和正常形態(tài)率與對照組

7、相比未見顯著差異(P>；0.05)。老年小鼠附翠尾精子密度、活動率和正常形態(tài)率均低于對照組(p<；0.05),體外受精率顯著低于對照組(尸<；0.001),且受精后胚胎發(fā)育率降低(P<；0.01)。
　　結(jié)論
　　1.老年人肇丸組織顯示出增齡性結(jié)構(gòu)改變,表現(xiàn)為曲細精管內(nèi)支持細胞數(shù)目減少,精原細胞未減少,初級精母細胞及其后階段的精子細胞明顯減少,表明老年人翠丸精子發(fā)生是衰減的。
　　2.老年人辜丸生精細胞