雷公藤多甙抑制大鼠精子發(fā)生及其機(jī)制的研究.pdf

1、精子發(fā)生是在內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)控下完成的。下丘腦分泌促性腺激素釋放激素(GnRH)刺激垂體分泌卵泡刺激素(FSH)和黃體生成素(LH)，LH作用于睪丸間質(zhì)細(xì)胞，使其分泌睪酮(T)。一般認(rèn)為精子發(fā)生需FSH和T的雙重作用。如果給與外源性雄激素(TE、TU)，反饋性抑制FSH和LH，使睪丸局部T濃度下降，可抑制精子發(fā)生.男性激素避孕的主要方法有單用雄激素、雄激素與孕激素合用、雄激素與其他制劑及物理方法合用。目前國際上廣泛采用的男性避孕藥是雄激素

2、類和孕激素類甾體激素的藥物組合，如醋酸賽普特隆(cyproteroneacetate)和十一酸睪丸酮(testosterone undecanoate，TU)、DMPA+TU，目的是達(dá)到最大程度的FSH和LH的反饋抑制，同時(shí)減少雄激素劑量，以避免因單獨(dú)使用雄激素而導(dǎo)致其血液濃度的巨大波動(dòng)。近年，國際上提出了男性抗生育的“雙重打擊”學(xué)說，即在激素作用(及激素機(jī)制)之外，合并使用物理的、化學(xué)的、或者其他分子機(jī)制途徑的方法。雷公藤多甙具有明顯

3、的抑精作用，早在上個(gè)世紀(jì)80年代初，我國學(xué)者已發(fā)現(xiàn)口服雷公藤多甙可致男性精子計(jì)數(shù)下降，停藥后可恢復(fù)正常。后來動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明雷公藤多甙主要影響附睪精子，表現(xiàn)為損傷精子微管、微絲和胞膜頭尾分離和頂體彎曲，在附睪管腔可見脫落的精子細(xì)胞，組織學(xué)觀察顯示曲細(xì)精管和附睪上皮損傷輕微。但睪丸生精細(xì)胞也受影響。然而雷公藤多甙對(duì)睪丸生殖細(xì)胞作用的深層次的分子機(jī)制仍然不清楚。定性研究一些雷公藤多甙抑制精子發(fā)生、誘導(dǎo)生精細(xì)胞凋亡分子信號(hào)通路，為將來與男性激

4、素合并應(yīng)用作為男性避孕藥奠定基礎(chǔ). 研究目的 本項(xiàng)研究中，探討雷公藤多甙抑制大鼠精子發(fā)生、誘導(dǎo)生精細(xì)胞凋亡的作用，同時(shí)觀察對(duì)精子活率、畸形率的影響；用免疫組化的方法研究雷公藤多甙促進(jìn)生殖細(xì)胞凋亡的多個(gè)分子信號(hào)通路上的關(guān)鍵分子.深入的細(xì)胞與分子機(jī)制的研究，驗(yàn)證雄激素合并雷公藤多甙組合方式可能的“雙重打擊”機(jī)制，為將來雷公藤多甙與男性激素合并應(yīng)用作為男性避孕藥奠定基礎(chǔ)。 研究方法 本研究設(shè)計(jì)中，40只成年雄性

5、SD大鼠被分為4組，正常對(duì)照組，灌胃給予生理鹽水；3個(gè)雷公藤多甙處理組，灌胃給予雷公藤多甙16mg/kg，給藥時(shí)間分別為2周、4周、6周。每日一次，在2及6周用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清睪酮、FSH、LH和可的松水平；在2、4及6周取-側(cè)附睪進(jìn)行精子計(jì)數(shù)和活動(dòng)率檢測(cè)。在2、4及6周分別用Bouin’s和5％二甲砷酸鈉灌流并固定睪丸二甲砷酸鈉灌流并固定的睪丸用于原位末端標(biāo)記法(TUNEL)觀察睪丸生精細(xì)胞凋亡；Bouin’s灌流并固定的睪丸，HE

6、染色后光鏡觀察睪丸組織的形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)法觀察凋亡通路的相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2、Fas/FasL和Caspase-3的表達(dá)。 研究結(jié)果 給藥2周后大鼠血清FSH、LH、T、E2和可的松平均值分別為3.85IU/L、3.98IU/L、3.91 nmol/L、201.3×10-15mol/L和113.4x 10-9mol/L，6周后分別為4.1 IU/L、3.88 IU/L、3.82 nmol/L、226.5x1

7、0-15mol/L和102.1x10-9mol/L，與對(duì)照組相比(3.9IU/L、4.21 IU/L、3.71 nmol/L、207.6x10-15mol/L和105.3x10-9mol/L)都無顯著差異(P均>0.05)；給藥2周后平均精子數(shù)下降到52x106/ml，活精子率下降到60％，和畸形率上升到1.2％，與對(duì)照組(平均精子數(shù)：62x106/ml，活精子率：79％，畸形率：1.2％)相比有顯著差異(p均<0.05)；給藥4周(平

8、均精子數(shù)：15x106/ml，活精子率：24％，畸形率：56％)和6周(平均精子數(shù)：9x106/ml，活精子率：8％，畸形率：66％)平均精子計(jì)數(shù)下降、活精子率下降和精子畸形率升高更顯著(P<0.001)；組織學(xué)檢查，正常對(duì)照組可見大鼠睪丸曲細(xì)精管生精細(xì)胞數(shù)目較多及層次清晰，管壁較厚，生精細(xì)胞排整齊，給藥組可見大鼠睪丸曲細(xì)精管生精細(xì)胞數(shù)目減少及層次減少，管壁變薄，生精細(xì)胞排列紊亂，原始精原細(xì)胞和支持細(xì)胞未見明顯改變.TUNEL顯示給藥2

9、周后生精小管內(nèi)的生精細(xì)胞凋亡增加到42.2％，與正常對(duì)照組(21.1％)相比，有顯著差異(P<0.05)，4周(81.1％)和6周(96.5％)生精細(xì)胞凋亡增加更明顯(4和6周P<0.001)。免疫組織化學(xué)顯示，凋亡相關(guān)蛋白Bax、Fas、 FasL和Caspase-3的表達(dá)明顯上調(diào)，Bcl-2的表達(dá)無顯著差異。 研究結(jié)論 雷公藤對(duì)大鼠精子發(fā)生的抑制作用，其細(xì)胞學(xué)機(jī)制表現(xiàn)為誘導(dǎo)生精細(xì)胞凋亡增加，同時(shí)精子的畸形率升高，活率