兩種營(yíng)養(yǎng)因素影響腸粘膜免疫和免疫系統(tǒng)發(fā)育的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、適宜的營(yíng)養(yǎng)水平是兒童免疫系統(tǒng)發(fā)揮正常生理功能并不斷向前發(fā)育成熟的重要保證?，F(xiàn)實(shí)中對(duì)兒童的營(yíng)養(yǎng)性干預(yù)主要見于兩個(gè)方面：糾正營(yíng)養(yǎng)失衡所造成的免疫功能受損及發(fā)育受阻，恢復(fù)正常狀態(tài)下機(jī)體對(duì)疾病的防御能力；通過營(yíng)造一個(gè)良好的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，促進(jìn)兒童時(shí)期免疫系統(tǒng)的生長(zhǎng)發(fā)育，提高兒童時(shí)期的免疫能力，進(jìn)而發(fā)揮疾病預(yù)防和促進(jìn)遠(yuǎn)期健康的作用。本研究就維生素A調(diào)節(jié)腸粘膜免疫功能的作用途徑與機(jī)制、雙歧桿菌對(duì)局部和全身免疫系統(tǒng)發(fā)育的影響分別進(jìn)行了探討，以期在上述兩個(gè)方

2、面豐富兒童營(yíng)養(yǎng)與免疫關(guān)系的認(rèn)識(shí)。
　　第一部分視黃酸對(duì)腸道樹突狀細(xì)胞成熟分化及其功能的影響
　　目的：通過研究維生素A在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物-視黃酸(retinoicacid，RA)對(duì)腸粘膜樹突狀細(xì)胞(dedriticcell，DC)的數(shù)量、成熟分化和細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響，及其作用的途徑，從免疫應(yīng)答的初始環(huán)節(jié)探討維生素A調(diào)節(jié)腸粘膜免疫的作用及其機(jī)制，為臨床正確應(yīng)用維生素A營(yíng)養(yǎng)防治疾病提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：大鼠腸粘

3、膜的集合淋巴結(jié)(Peyer'spatches，PP結(jié))體外培養(yǎng)，分為：對(duì)照組；RA組，加入全反式視黃酸(at-RA)；RA+RO組，同時(shí)加入RA和視黃酸受體RARα特異性拮抗劑(Ro41-5253)。于培養(yǎng)24h、48h收獲組織塊后，1、采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)大鼠DC表面分化標(biāo)志，觀察RA對(duì)PP結(jié)DC數(shù)目(OX62陽性細(xì)胞百分比)和成熟分化(OX6、CD86熒光強(qiáng)度)的影響；2、采用熒光定量PCR的方法，觀察RA對(duì)PP結(jié)細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄水平

4、的影響，以及RARαmRNA表達(dá)水平的相應(yīng)變化。
　　結(jié)果：1、培養(yǎng)24h和48h，三組PP結(jié)DC數(shù)目均無顯著差異，但RA處理后DC的成熟度明顯升高，該作用于培養(yǎng)24h顯著；2、RA處理使得PP結(jié)細(xì)胞因子IL-12(主要由DC分泌)和IFN-γ(Th1細(xì)胞因子)的mRNA水平下調(diào)，調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子IL-10的mRNA表達(dá)升高，而Th2細(xì)胞因子IL-4的產(chǎn)生無明顯變化。此外，加入RA后可使RARα在PP結(jié)的基因表達(dá)上調(diào)；3、當(dāng)Ro同時(shí)

5、加入時(shí)，則可逆轉(zhuǎn)RA的上述作用。
　　結(jié)論：1、視黃酸可促進(jìn)體外培養(yǎng)的PP結(jié)中DC的成熟，并使后續(xù)的免疫應(yīng)答反應(yīng)向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的方向偏倚，有利于粘膜免疫穩(wěn)態(tài)的維持，防止局部過度炎癥反應(yīng)的發(fā)生；2、RARα參與了視黃酸對(duì)腸粘膜免疫的調(diào)節(jié)作用。
　　第二部分生后早期腸道雙歧桿菌定植對(duì)免疫系統(tǒng)發(fā)育的影響
　　目的：通過建立生后早期腸道雙歧桿菌減滅或額外定植的動(dòng)物模型，研究在免疫發(fā)育過程中，雙歧桿菌對(duì)DC數(shù)量、成熟分化和功能的

6、作用，以及對(duì)T細(xì)胞應(yīng)答類型的調(diào)節(jié)、對(duì)抗體生成的影響，從抗原提呈、細(xì)胞免疫和體液免疫三方面，探討雙歧桿菌促進(jìn)免疫系統(tǒng)發(fā)育的作用途徑與機(jī)制，為在兒童中科學(xué)合理應(yīng)用益生菌提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：飼養(yǎng)在嚴(yán)格屏障環(huán)境的新生大鼠從出生起每天給予大劑量抗生素腸道滅菌(低菌組)或口服接種長(zhǎng)雙歧桿菌(增菌組)，分別于生后1W、3W和6W觀察以下免疫發(fā)育指標(biāo)；1、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)，了解雙歧桿菌對(duì)PP結(jié)、脾臟和外周血中DC數(shù)目(OX62陽性細(xì)胞百

7、分比)和成熟度(CD86熒光強(qiáng)度)、T細(xì)胞亞群分布，以及胸腺中T細(xì)胞發(fā)育成熟的影響；2、采用熒光定量PCR和ELISA的方法，了解雙歧桿菌對(duì)腸粘膜和血漿細(xì)胞因子表達(dá)水平，以及體外培養(yǎng)的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄水平的影響；3、應(yīng)用ELISA的方法，了解雙歧桿菌對(duì)PBMCs生成抗體(IgG和IgM)能力的影響。
　　結(jié)果：1、低菌組PP結(jié)中DC的成熟

8、度降低，增菌組則增高；低菌組胸腺中未成熟的CD4+CD8+T細(xì)胞向CD4+或CD8+成熟T細(xì)胞的分化發(fā)育延緩；2、低菌組的腸粘膜IL-12(主要由DC分泌)、IL-10(調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子)的mRNA以及IFN-γ/IL-4(Th1/Th2)比值均下調(diào)，血漿IL-4分泌增多，PBMCs體外刺激后IFN-γ表達(dá)降低；增菌組的腸粘膜IL-12、IFN-γ、IL-10mRNA以及IFN-γ/IL-4均上調(diào)，PBMCs的IFN-γ表達(dá)增高；3、低菌