不同劑量頭孢克洛和雙歧桿菌對幼鼠腸道免疫系統(tǒng)發(fā)育和腸道菌群影響的研究.pdf

1、目的： 探討不同劑量頭孢克洛(Cefaclor)和雙歧桿菌(Bacillus bifidus，BB)對幼鼠腸道免疫系統(tǒng)發(fā)育和腸道菌群的影響。 方法： 實驗選用80只SPF(specific pathogen free)級SD(Sprague-Dawlay)大鼠，7日齡，15～20克，隨機分成7組：A組(7日齡組)，B組(150mg/kg/d頭孢克洛干預(yù)2周)，C組(50mg/kg/d頭孢克洛干預(yù)2周)，D組(50

2、0萬單位雙歧桿菌干預(yù)2周)，E組(1500萬單位雙歧桿菌干預(yù)2周)，F(xiàn)組(500萬單位雙歧桿菌2小時后100mg/kg/d頭孢克洛干預(yù)2周)，G組(空白對照組)，其中A組8只，余6組各12只，各組體重?zé)o顯著差異(P>0.05)。A組在第一天處死，余6組在第21天隨機抽取8只處死，留取回盲部近端腸管組織及盲腸內(nèi)糞便。SABC免疫組化法(immunohistochemistry，IHC)檢測腸管組織CD4+、CD8+T細胞含量；大便涂片革蘭

3、氏染色檢測革蘭氏陽性桿菌(G+b)、革蘭陰性桿菌(G-b)、革蘭陽性球菌(G+c)，革蘭陰性球菌(G-c)各菌群數(shù)；16S rRNA熒光相對定量PCR法檢測糞便雙歧桿菌(bacillus bifidus，BB)、乳酸桿菌(lactobacillus，LB)、脆弱類桿菌(bacteroides fragilis，BF)、梭菌(clostridium botulinum，CL)4種細菌的相對含量。 結(jié)果： 1.CD4+、CD

4、8+T細胞含量： 1.1 CD4+T細胞含量 B、C、F組CD4+T細胞相應(yīng)灰度值[分別為(158.94±10.08)、(115.29±17.39)、(107.71±16.62)]顯著高于G組[(92.50±11.30)](P值分別<0.01，<0.01，<0.05)。B、C、F三組兩兩比較，C組和F組均顯著低于B組(P值均<0.01)；C組與F組兩兩比較無差異(P值均>0.05)。D、E組CD4+T細胞相應(yīng)灰度值[分別為(79

5、.48±5.43)、(77.04±7.72)]較G組降低(P<0.05)，而D組與E組兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。 1.2 CD8+T細胞含量 B、C組CD8+T細胞相應(yīng)灰度值[分別為(107.91±8.85)、(103.78±10.30)]高于G組[(80.81±14.80)](P<0.05)，而D、E組CD8+T細胞相應(yīng)灰度值[分別為(59.28±5.81)、(58.95±7.81)]較G組降低(P<0.

6、05)。F組CD8+T細胞相應(yīng)灰度值[(101.95±11.67)]與G組比較無差異(P>0.05)，但高于D、E組(P值均<0.01)。B、C、F三組兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。 2.腸道菌群檢測結(jié)果： 2.1桿菌總數(shù)、球菌總數(shù)及其比值 B、C、F組桿菌總數(shù)[分別為(177.00±3.42)、(178.63±3.42)、(178.00±3.46)]顯著低于G、D、E組[分別為(196.75±1.3

7、6)、(196.88±1.25)、(196.88±0.99)](P值均<0.01)。B、C、F組球菌總數(shù)[分別為(23.00±3.42)、(21.38±3.42)、(22.13±3.52)]顯著高于G、D、E組[分別為(3.25±0.89)、(3.25±1.04)、(3.13±0.99)](P值均<0.01)。B、C、F組桿球菌比值[分別為(7.86±1.31)、(8.60±1.75)、(8.24±1.42)]顯著低于G、D、E組[分別

8、為(64.42±17.27)、(66.56±22.41)、(68.58±21.19)](P值均<0.01)。B、C、F組桿菌總數(shù)、球菌總數(shù)及桿球菌比值，三組兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。G、D、E組桿菌總數(shù)、球菌總數(shù)及桿球菌比值，三組兩兩比較差異亦均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。 2.2 G+桿菌占總菌群數(shù)比率 B、C、F組G+桿菌占總菌群數(shù)比率[分別為(13.38±1.51)％、(24.06±3.89)％

9、、(15.50±1.95)％]顯著低于G、D、E組[分別為(48.31±2.60)％、(46.56±2.03)％、(46.63±2.89)％](P值均<0.01)。其中B、C、F三組兩兩比較，B組和F組均顯著低于C組(P值均<0.01)；B組與F組比較無差異(P值均>0.05)。而G、D、E三組兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(值均>0.05)。 2.3 G+球菌占總菌群數(shù)比率 B、C、F組G+球菌占總菌群數(shù)比率[分別為(10.50

10、±1.60)％、(9.75±1.51)％、(10.06±1.72)％]顯著高于G、D、E組[分別為(1.25±0.27)％、(1.13±0.44)％、(1.19±0.46)％](P值均<0.01)。B、C、F三組兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。G、D、E三組兩兩比較差異亦均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。 3.BB、LB、BF、CL4種細菌的相對含量： 3.1 BB相對含量 B、C、F組BB相對含量[分

11、別為(0.17265±0.03219)、(0.38493±0.01453)、(0.40909±0.07239)]顯著低于G、D、E組[分別為(0.62473±0.08555)、(0.60160±0.05108)、(1.12013±0.38711)](P<0.01或P<0.05)。其中B、C、F三組兩兩比較，C組和F組均顯著高于B組(P值分別<0.05、<0.01)；C組與F組比較無明顯差異(P值均>0.05)。而G、D、E三組兩兩比較，

12、E組顯著高于G組和D組(P值均<0.01)，G組與D組比較無明顯差異(P值均>0.05)。 3.2 LB相對含量 B組LB相對含量[(0.02117±000793)]顯著低于G、C、D、E、F組[分別為(0.09233±0.04382)、(0.08768±0.00886)、(0.11830±0.01404)、(0.11705±0.01358)、(0.09298±0.05705)](P值均<0.01)。而G、C、D、E、F五組之間

13、兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。 3.3 BF相對含量比較 G、B、C、D、E、F六組之間兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。 3.4 CL相對含量 B組CL相對含量[(0.00329±0.00303)]顯著高于G、C、D、E、F組[分別為(0.00017±0.00015)、(0.00073±0.00065)、(0.00016±0.00022)、(0.00010±0.00004)、(0.0

14、0154±0.00029)](P值均<0.01)。F組CL相對含量均高于G、D、E三組(P值均<0.05)，F(xiàn)組與C組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。余C、G、D、E四組兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)。 結(jié)論： 1.不同劑量頭孢克洛均可降低SD大鼠腸道免疫能力，而不同劑量雙歧桿菌對SD大鼠腸道免疫功能具有一定的正向調(diào)節(jié)作用。先予雙歧桿菌后予頭孢克洛，SD大鼠腸道免疫能力下降，雙歧桿菌未能起到免疫保護作