逆轉錄病毒載體攜帶目的基因防治增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的實驗研究.pdf

1、同濟醫(yī)科大學博士學位論文逆轉錄病毒載體攜帶目的基因防治增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的實驗研究姓名：萬光明申請學位級別：博士專業(yè)：眼科學指導教師：曾水清19990401法為體內(nèi)直接基因轉染。j實一驗一r f 逆轉錄病毒載體在P V R 模型眼內(nèi)定向轉移報告基因的實驗研究目的：為了探討體內(nèi)直接轉移基因治療增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變( P V R ) 的可行性，我們用口一半乳糖苷酶基因( 1 a c Z 基因)作為報告基因，以逆轉錄病毒載體攜之直接注入

2、P V R 模型眼玻璃體腔中，觀察其在P V R 模型眼各組織表達情況，為今后眼內(nèi)直接轉移目的基因( 如自殺基因) 治療P V R 提供依據(jù)。方法：將P L X S N ／I a c Z 質粒導入P A 3 1 7 細胞，經(jīng)篩選抗性克隆及克隧擴增后制備P L X S N ／l a c Z 復制缺陷病毒。選用2 ～3 K g 重的有色家兔3 0 只，實驗組2 0 只( 選2 0 眼) ，對照組l O 只( 選1 0 眼) ，麻醉后制作P

3、V R 模型。在注入成纖維細胞后第6 天實驗組玻璃體注入0 ．I m l P L X S N ／l a c Z 病毒上清液( 1 ．1 ×1 0 6 c f u ／m l ，對照組注入0 ．i m l P L X S N ／1 a c Z 質粒D N A5 0 pg 分別進行基因轉染?；蜣D染后第1 0 天、第3 0 天分別取出眼球，去掉眼前節(jié)行X —g a l 組化染色。另選2 只動物( 2 眼) 不作P V R 模型，而將