逆轉(zhuǎn)錄病毒載體攜帶目的基因防治增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文逆轉(zhuǎn)錄病毒載體攜帶目的基因防治增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變的實(shí)驗(yàn)研究姓名：萬(wàn)光明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：曾水清19990401法為體內(nèi)直接基因轉(zhuǎn)染。j實(shí)一驗(yàn)一r f 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體在P V R 模型眼內(nèi)定向轉(zhuǎn)移報(bào)告基因的實(shí)驗(yàn)研究目的：為了探討體內(nèi)直接轉(zhuǎn)移基因治療增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變( P V R ) 的可行性，我們用口一半乳糖苷酶基因( 1 a c Z 基因)作為報(bào)告基因，以逆轉(zhuǎn)錄病毒載體攜之直接注入

2、P V R 模型眼玻璃體腔中，觀察其在P V R 模型眼各組織表達(dá)情況，為今后眼內(nèi)直接轉(zhuǎn)移目的基因( 如自殺基因) 治療P V R 提供依據(jù)。方法：將P L X S N ／I a c Z 質(zhì)粒導(dǎo)入P A 3 1 7 細(xì)胞，經(jīng)篩選抗性克隆及克隧擴(kuò)增后制備P L X S N ／l a c Z 復(fù)制缺陷病毒。選用2 ～3 K g 重的有色家兔3 0 只，實(shí)驗(yàn)組2 0 只( 選2 0 眼) ，對(duì)照組l O 只( 選1 0 眼) ，麻醉后制作P

3、V R 模型。在注入成纖維細(xì)胞后第6 天實(shí)驗(yàn)組玻璃體注入0 ．I m l P L X S N ／l a c Z 病毒上清液( 1 ．1 ×1 0 6 c f u ／m l ，對(duì)照組注入0 ．i m l P L X S N ／1 a c Z 質(zhì)粒D N A5 0 pg 分別進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染?；蜣D(zhuǎn)染后第1 0 天、第3 0 天分別取出眼球，去掉眼前節(jié)行X —g a l 組化染色。另選2 只動(dòng)物( 2 眼) 不作P V R 模型，而將