醫(yī)用幾丁糖防治增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的實驗研究.pdf

1、目的： 增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變是嚴(yán)重的致盲性眼病之一，臨床上復(fù)雜難治。玻璃體切割術(shù)雖可有效切除增生膜，解除視網(wǎng)膜牽拉，但卻不能徹底解決增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變形成的根本問題一細胞增生。因此藥物防治增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變具有非常重要的意義。醫(yī)用幾丁糖(chitosan)具有良好的生物相容性和緩釋性，可以抑制成纖維細胞及視網(wǎng)膜色素上皮細胞增生，且玻璃體腔內(nèi)填充醫(yī)用幾丁糖對兔眼內(nèi)組織結(jié)構(gòu)無明顯影響。本實驗通過制備增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變動

2、物模型，玻璃體腔內(nèi)注射不同濃度的醫(yī)用幾丁糖，觀察術(shù)后不同時期玻璃體視網(wǎng)膜的改變，應(yīng)用酶連免疫吸附實驗和放射免疫方法分別對玻璃體腔內(nèi)堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和白細胞介素-6(IL-6)的含量進行定量分析及觀察視網(wǎng)膜組織病理學(xué)改變，探討醫(yī)用幾丁糖對增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的防治作用。為醫(yī)用幾丁糖防治增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 方法： 選用健康新西蘭大白兔40只，左眼為實驗眼。隨機分為5組，正常對照

3、組：玻璃體腔內(nèi)不予注射：模型組：玻璃體腔內(nèi)注射0.1ml生理鹽水和0.1ml自血；實驗1、2、3、組玻璃體腔內(nèi)分別注射0.ml醫(yī)用幾丁糖(5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml)和0.1ml自血。用裂隙燈顯微鏡、眼底鏡、B超觀察記錄玻璃體視網(wǎng)膜的情況。各組實驗動物分別于術(shù)后第28天麻醉下抽取玻璃體后立即摘除眼球，去除角膜和晶體，取距視盤2PD的顳側(cè)視網(wǎng)膜組織10mm×10mm大小，固定于10％甲醛溶液中，石蠟包埋，制成組織切片。用

4、HE染色法，光鏡下觀察視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)。應(yīng)用酶連免疫吸附實驗和放射免疫方法分別定量檢測玻璃體腔內(nèi)bFGF和IL-6的含量。實驗數(shù)據(jù)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件分析。 結(jié)果： 1 裂隙燈顯微鏡、眼底鏡觀察不同時期玻璃體視網(wǎng)膜的增生情況第1、3、7天時實驗1、2、3組玻璃體視網(wǎng)膜增生級別較模型組無顯著差異性(P>0.05)，但增生相對較緩慢。第14天時模型組、實驗1、2、3組的平均增生級別分別為：2.63、2.25、1.38、0

5、.75，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)秩和檢驗P=0.0047；第21天時各組的平均增生級別分別為：3.00、2.5、2.07、0.93，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)秩和檢驗P=0.0098；第28天時各組的平均增生級別分別為：3.13、2.63、2.38、1.07，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)秩和檢驗P=0.0092；第14天、21天、28天時各組間均有顯著性差異(P<0.01)。實驗3組PVR嚴(yán)重程度均顯著低于模型組及另2個治療組(P<0.05)，而實驗1、2組與模型組間比較均無顯著差異性(P

6、>0.05)。 2 B超正常對照組：玻璃體腔透明，未見異?；芈?。第1天，模型組及實驗各組：玻璃體腔內(nèi)可探及局限性團狀中強回聲光斑。第3天，模型組及實驗各組：玻璃體腔內(nèi)可探及絮狀、點片狀，團塊狀中強回聲光斑。第7天，模型組：玻璃體腔內(nèi)可探及形態(tài)不規(guī)則，強度不等的條狀中強回聲光帶，不與眼球壁相連，有明顯的后運動；實驗3組：玻璃體內(nèi)可探及大量點狀、片狀、條狀中強回聲光斑，不與眼球壁光帶相連，有明顯后運動。第14天，模型組：玻璃體腔內(nèi)可

7、探及絮狀、片狀，條狀強回聲光斑，不與眼球壁相連，有明顯的后運動；實驗3組：玻璃體腔內(nèi)可探及點片狀、條狀中強回聲光斑，不與眼球壁相連，有明顯的后運動。第21天，模型組：玻璃體腔內(nèi)可探及聚集成片的中強回聲光斑及條狀強回聲光帶，不與眼球壁相連，有明顯的后運動；實驗3組：玻璃體腔內(nèi)可探及不均勻的、長短不一、走行不規(guī)則的中強回聲光帶，與眼球壁單一接觸的有明顯后運動。第28天，模型組：玻璃體腔內(nèi)可探及形態(tài)不規(guī)則、強度不等的條帶狀強回聲光帶，與眼球壁

8、光帶相連，缺乏后運動；實驗3組：玻璃體腔內(nèi)可探及形態(tài)不規(guī)則的中強回聲光斑，不與眼球壁光帶相連，有明顯的后運動。 3 bFGF，IL-6含量的定量分析結(jié)果3．1與正常對照組比較模型組中bFGF的含量(282.20±32.88)pg/ml，明顯高于正常對照組(86.29±11.05)pg/ml，(P<0.01)；實驗1、2、3組中bFGF的含量分別為(231.01±50/79)pg/ml、(145.79±33.77)pg/ml、(123.4

9、5±25.14)pg/ml，均較正常對照組顯著升高(實驗1、2組與正常對照組比較P<0.01，實驗3組與正常對照組比較P<0.05)；模型組中IL-6的含量(295.97±106.40)pg/ml，顯著高于正常對照(37.97±4.66)pg/ml，(P<0.01)；實驗1、2、3組中IL-6含量分別為(230.08±51.28)pg/ml、(169.31±42.07)pg/ml、(116.83±17.04)pg/ml，均較正常對照組顯

10、著升高(P均<0.01)。 3．2與模型組比較實驗1、2、3組中bFGF的含量均顯著低于模型組(P均<0.01)；實驗1、2、3、組中IL-6含量均顯著低于模型組(實驗1組與模型組比較P<0.05，實驗2、3組與模型組比較P均<0.01)。 3．3實驗組間比較實驗2、3組bFGF的含量與實驗1組比較均有顯著性差異(P<0.01)，實驗2組與實驗3組比較無顯著性差異(P>0.05)；實驗2、3組IL-6的含量與實驗1組比較均有顯著

11、性差異(實驗2組與實驗1組比較P<0.05，實驗3組與實驗1組比較P<0.01)；實驗2組與實驗3組比較無顯著性差異(P>0.05)。 4 組織病理學(xué)改變正常對照組：視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)清晰，未見水腫及細胞數(shù)量的變化，玻璃體腔透明，未見滲出、出血及纖維增生膜形成；模型組：視網(wǎng)膜可見神經(jīng)纖維層局部性水腫，神經(jīng)節(jié)細胞層輕度水腫，細胞數(shù)減少，神經(jīng)膠質(zhì)細胞數(shù)量增加，玻璃體腔中有少量滲出和出血，有纖維增殖膜形成，其內(nèi)有圓形和梭形細胞：實驗1

12、組：視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)紊亂，神經(jīng)纖維層局部性水腫，玻璃體腔內(nèi)有滲出和出血，有纖維增殖膜形成；實驗2組：視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)紊亂，神經(jīng)纖維層局部性水腫，玻璃體腔內(nèi)可見纖維素性滲出及增殖膜形成；實驗3組：視網(wǎng)膜各層組織結(jié)構(gòu)稍紊亂，細胞排列整齊，局部性神經(jīng)纖維層水腫，玻璃體腔內(nèi)有少許滲出物附于內(nèi)界膜上。 結(jié)論： 1 bFGF、IL-6的含量在PVR模型組較正常對照組明顯升高，說明bFGF、IL-6參與了增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的發(fā)