電針“合谷”“三陰交”對(duì)急性宮頸擴(kuò)張大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響.pdf

1、目的:
　　探討脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化在宮頸擴(kuò)張(uterine cervical distension，UCD)所致急性內(nèi)臟痛中的作用，以及電針刺激“合谷”“三陰交”是否通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化緩解UCD大鼠內(nèi)臟痛。
　　方法:
　　按照文獻(xiàn)介紹的方法并略作改良后行宮頸擴(kuò)張，二個(gè)自制細(xì)金屬鉤（以22G穿刺針彎曲制成）尖端分別從一側(cè)宮體與宮頸交界處穿入進(jìn)入宮頸腔，再?gòu)膶m頸與陰道交界處穿出，金屬鉤末端各懸掛砝碼擴(kuò)張宮頸，建立大

2、鼠急性UCD模型。
　　第一部分:
　　觀察UCD后大鼠腹直肌肌電(EMG)振幅變化。24只SD大鼠隨機(jī)分為3組(n=8):正常組、Sham組和UCD組。正常組不做任何處理;Sham組手術(shù)暴露宮頸，但不行宮頸擴(kuò)張;UCD組手術(shù)暴露宮頸后行宮頸擴(kuò)張，擴(kuò)張強(qiáng)度為75g。于宮頸擴(kuò)張后30min、60min、120min分別記錄大鼠EMG振幅變化。
　　第二部分:
　　觀察UCD對(duì)脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。分組同第一部分

3、(n=4)。第一部分實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)UCD后60min，大鼠EMG變化最為顯著，因此于宮頸擴(kuò)張60min后處死大鼠，4％多聚甲醛灌注后取胸腰段（T12-L2）脊髓標(biāo)本行免疫組化檢查，觀察UCD對(duì)大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。
　　第三部分:
　　36只鞘內(nèi)置管成功后的SD大鼠隨機(jī)分為米諾環(huán)素組、PBS組、UCD組(n=12)。米諾環(huán)素組連續(xù)3天鞘內(nèi)注射0.5nmol米諾環(huán)素后行UCD造模。PBS組、UCD組則分別相應(yīng)給予等劑量的PB

4、S、生理鹽水后行UCD造模。分別記錄造模后宮頸擴(kuò)張前各組大鼠EMG振幅基礎(chǔ)值及宮頸擴(kuò)張后30min、60min、120min時(shí)大鼠EMG振幅的變化(n=8)。其余每組4只大鼠于宮頸擴(kuò)張60min后處死大鼠，4％多聚甲醛灌注后取胸腰段（T12-L2）脊髓標(biāo)本行免疫組化檢查，觀察鞘內(nèi)米諾環(huán)素對(duì)UCD大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。
　　第四部分:
　　36只SD大鼠隨機(jī)分為電針組、電針對(duì)照組、UCD組(n=12)。電針組將針灸針刺

5、入大鼠雙側(cè)“合谷”“三陰交”（“合谷”穴位于前肢第一、二掌骨之間，進(jìn)針深度1mm;“三陰交”穴位于后肢內(nèi)踝尖直上10mm處，進(jìn)針深度3mm)后接韓氏穴位神經(jīng)刺激儀給予2/100Hz疏密波電刺激30min(輸出電流為10-14mA)后行UCD造模，造模成功后繼續(xù)給以2/100Hz疏密波電刺激120min，電針對(duì)照組只針刺不接韓氏穴位神經(jīng)刺激儀刺激，UCD組則無任何處理直接行UCD造模。分別記錄各組UCD后30min、60min、120mi

6、n大鼠EMG振幅的變化(n=8)。其余每組4只大鼠于宮頸擴(kuò)張60min后處死，4％多聚甲醛灌注后取胸腰段（T12-L2）脊髓標(biāo)本行免疫組化檢查，觀察電針刺激對(duì)UCD大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。
　　結(jié)果:
　　第一部分:
　　Sham組、正常組、UCD組(n=8)大鼠EMG基礎(chǔ)值振幅差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。造模后，UCD組大鼠EMG振幅與基礎(chǔ)值相比在UCD后30min、60min、120min均增加，差異有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05);UCD后30min、60min、120min三個(gè)時(shí)間段相比，以UCD60min時(shí)EMG振幅增加最為明顯（P＜0.05）。
　　宮頸擴(kuò)張后30min、60min、120min，與Sham組比較，UCD組大鼠EMG振幅增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但正常組與Sham組相比大鼠EMG振幅變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　第二部分:
　　UCD后，與Sham組相比，UCD組大鼠脊髓

8、胸腰段（T12-L2）Iba1（小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物）反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;免疫陽性細(xì)胞主要集中在胸腰段雙側(cè)脊髓背角深層（Ⅳ～Ⅴ層）及中央管周圍（X層）。Sham組與正常組相比Iba1反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)量無明顯差異(P＞0.05)。
　　第三部分:
　　UCD組、PBS組、米諾環(huán)素組大鼠EMG基礎(chǔ)值振幅差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　與基礎(chǔ)值相比，各組UCD后30min、60min

9、、120min EMG振幅明顯增加(P＜0.05）。與PBS組相比，UCD后60min、120min，米諾環(huán)素組EMG振幅明顯減弱;但UCD后30min，兩組間EMG振幅無明顯差異。PBS組與UCD組相比，UCD后各時(shí)間點(diǎn)EMG振幅差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。
　　UCD后60min，米諾環(huán)素組大鼠脊髓胸腰段（T12-L2）Iba1反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)量較PBS組顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;但PBS組與UCD組

10、相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　第四部分:
　　UCD組、電針組、電針對(duì)照組大鼠EMG基礎(chǔ)值振幅差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　與基礎(chǔ)值相比，各組UCD后30mi n、60min、120min EMG振幅明顯增加(P＜0.05）。UCD后60min、120min，與電針對(duì)照組相比，電針組大鼠EMG振幅減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;但UCD后30min電針對(duì)照組與電針組間EMG振幅無明顯差異

11、。UCD后各時(shí)間點(diǎn)，電針對(duì)照組與UCD組相比，大鼠EMG振幅差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。
　　UCD后60min，電針組大鼠脊髓胸腰段(T12 L2) Iba1反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)量較電針對(duì)照組顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但電針對(duì)照組與UCD組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的活化參與了宮頸擴(kuò)張所致急性內(nèi)臟痛的形成;
　　2.電針刺激“合谷”“三陰交”