三種不同途徑移植BMSCs對(duì)脊髓損傷后脊髓及小膠質(zhì)細(xì)胞功能影響的研究.pdf

1、目的：分離、培養(yǎng)及鑒定SD大鼠BMSCs，建立研究SD大鼠T10脊髓鉗夾損傷模型，觀察經(jīng)局部移植、尾靜脈移植、蛛網(wǎng)膜下腔移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）對(duì)SD大鼠脊髓損傷后脊髓及小膠質(zhì)細(xì)胞的功能影響。
　　方法：1、采用全骨髓差速貼壁生長(zhǎng)分離法培養(yǎng)BMSCs。通過(guò)向成骨、成脂及流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面標(biāo)志物CD29、CD34、CD45和CD90的表達(dá)來(lái)鑒定BMSCs

2、。2、應(yīng)用鉗夾法制備SD大鼠T10脊髓損傷模型，建立（1）空白對(duì)照組；（2）脊髓損傷BMSCs非移植組（再分為10組：術(shù)后6h組、12h組、24h組、72h組、1天組、3天組、7天組、14天組、21天組和28天組）；（3）脊髓損傷BMSCs移植組：每組又分為3組：局部移植組，尾靜脈移植組，蛛網(wǎng)膜下腔移植組（每組再分為10組），每組5只，共205只。術(shù)后5小時(shí)對(duì)移植組注射B MSCs懸液。觀察各組術(shù)后大鼠BBB評(píng)分；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，

3、觀察各組術(shù)后脊髓損傷區(qū)OX-42標(biāo)記的小膠質(zhì)細(xì)胞變化；利用ELISA觀察各組術(shù)后6h、12h、24h、72h脊髓損傷處IL-1β含量變化。
　　結(jié)果：（1）通過(guò)全骨髓差速貼壁法分離、培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外可進(jìn)行傳代、擴(kuò)增。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)證實(shí)分離培養(yǎng)所得細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。（2）用鉗夾法制作大鼠SCI模型后，SD大鼠出現(xiàn)典型的截癱癥狀。（3）BBB評(píng)分：移植后1周內(nèi)無(wú)明顯差異(p>0.05)。2周后，局部移植組和靜脈

4、移植組無(wú)明顯差異(p>0.05)，蛛網(wǎng)膜下腔移植組與局部移植組、靜脈移植組差異明顯（p<0.05）。（4）免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)，3天時(shí)OX-42陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目達(dá)峰值。對(duì)照組和移植組各時(shí)段平均OX-42陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均顯著高于空白對(duì)照組（P<0.05）。與對(duì)照組相比較，移植組各時(shí)段平均OX-42陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著降低（P<0.05）。蛛網(wǎng)膜下腔移植組較其他移植組小膠質(zhì)細(xì)胞免疫陽(yáng)性產(chǎn)物有明顯差異（p<0.05）。移植組IL-1β平均含量在損傷后6h、