RhoA在大鼠脊髓損傷后膠質(zhì)細胞活化增殖中的作用.pdf

1、目的：觀察脊髓損傷后損傷灶附近神經(jīng)元的病理變化及膠質(zhì)細胞增殖活化情況；觀察RhoA在大鼠脊髓損傷后的表達及RhoA在神經(jīng)元，小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、NG2膠質(zhì)細胞中的表達以及在神經(jīng)元的死亡和膠質(zhì)細胞增生活化中可能的作用。
　　方法：選擇SPF級雄性Wistar大鼠60只，體重約250-300g，所有大鼠在手術前后均自由進食水。大鼠隨機分為兩組（n=30）：手術組和假手術組：手術組用改良Allen's打擊法制作脊髓損傷模型（選擇大

2、鼠T10部位脊髓）；假手術組只手術切除椎板，不損傷脊髓。術后給予腹腔注射青霉素預防感染。分別于術后3d，7d，30d每組隨機取5只大鼠，取損傷灶附近脊髓組織（T9-11部位），用組織病理檢查觀察損傷部位脊髓組織病理學改變；用蘇木精染色觀察脊髓損傷部位神經(jīng)元死亡及膠質(zhì)細胞增生情況；WesternBlot檢測脊髓損傷后RhoA的表達，免疫組化雙標方法觀察RhoA在神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞中的表達和分布。
　　結(jié)果：使用膠質(zhì)纖維酸性蛋白熒光染色

3、顯示正常脊髓組織結(jié)構(gòu)連續(xù)，脊髓損傷后損傷部位組織出現(xiàn)部分壞死，且以損傷灶為中心形成空洞。蘇木精染色顯示大鼠脊髓損傷后，損傷灶周圍神經(jīng)元出現(xiàn)進行性壞死。另外使用GFAP、CD11b和NG2作為星形膠質(zhì)細胞、小膠質(zhì)細胞和NG2膠質(zhì)細胞的特異性標記物，免疫熒光單標顯示在正常脊髓組織中這三種膠質(zhì)細胞表達較少，脊髓損傷后3d到30d，損傷灶附近三種膠質(zhì)細胞的特異性標記物表達上調(diào)，脊髓損傷后3d可見，7d達高峰，持續(xù)至第30d（P<0.05）。免疫

4、熒光雙標（RhoA/Neun、RhoA/GFAP、RhoA/CD11b和RhoA/NG2）在激光共聚焦熒光顯微鏡下顯示正常脊髓組織神經(jīng)元中RhoA表達量少，脊髓損傷后損傷灶附近殘存的神經(jīng)元以及增生的星形膠質(zhì)細胞、小膠質(zhì)細胞RhoA表達均明顯升高，而NG2膠質(zhì)細胞未見RhoA表達。Westernblot提示對照組脊髓中RhoA僅有少量表達，脊髓損傷后3d可見脊髓中RhoA表達升高，7d達高峰,持續(xù)高表達至實驗結(jié)束（P<0.05）。