幽門螺桿菌對胃癌細(xì)胞標(biāo)miR-200c和RhoA表達(dá)的影響.pdf

1、胃癌(gastric cancer, GC)是最為常見的消化系統(tǒng)腫瘤，是世界范圍內(nèi)癌癥-相關(guān)死亡的第二大原因，也是我國最常見的惡性腫瘤之一，每年大約有40萬新增胃癌病例，死亡約30萬人。幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，H.pylori）感染是胃癌的主要危險因子。
　　微小核糖核酸-200c（miRNA-200c，miR-200c）屬于miR-200家族，主要調(diào)控上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenc

2、hymal transition，EMT)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-200c在胃癌組織樣本和胃癌細(xì)胞株中表達(dá)降低，與胃癌生長、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。RhoA屬于Rho亞家族成員中的小G蛋白，參與了H.pylori感染引起的與細(xì)胞動力有關(guān)的胃上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，從而影響胃癌的轉(zhuǎn)移和侵襲。RhoA在胃癌組織中呈高表達(dá)，也是miR-200c潛在的靶基因。因此，本研究擬闡明H.pylori對胃癌細(xì)胞株miR-200c、RhoA表達(dá)的影響及其可能

3、的機制。
　　目的：
　　探討H.pylori對胃癌細(xì)胞株miR-200c，及RhoA表達(dá)的影響及其可能的機制。
　　方法：
　　1.熒光實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測4株胃癌細(xì)胞株AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901中內(nèi)源性miR-200c的表達(dá)水平;
　　2.西方型H.pylori標(biāo)準(zhǔn)菌株11637與4株胃癌細(xì)胞株（AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901）共培

4、養(yǎng)，RT-PCR檢測細(xì)胞中miR-200c表達(dá)、RhoA mRNA的表達(dá);Western blot檢測RhoA蛋白的表達(dá);
　　3.應(yīng)用miR-200c類似物，miR-200c抑制物及其相應(yīng)的陰性對照物分別轉(zhuǎn)染4株胃癌細(xì)胞株，RT-PCR檢測RhoA的mRNA表達(dá)、Western blot檢測RhoA蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.4株胃癌細(xì)胞株AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901均不同程度表達(dá)

5、內(nèi)源性miR-200c，其中HGC-27細(xì)胞表達(dá)水平最高，BGC-823、SGC-7901細(xì)胞株表達(dá)水平相對居中，AGS細(xì)胞株表達(dá)水平最低。
　　2.H.pylori與4株胃癌細(xì)胞共培養(yǎng)6h、12h、24h、48h后，RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，胃癌細(xì)胞株AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901中miR-200c表達(dá)均降低（P均＜0.05），均以6h時表達(dá)最低，AGS、BGC-823、HGC-27、SGC

6、-7901細(xì)胞中miR-200c表達(dá)分別降低1.83±0.28、1.55±0.18、1.57±0.35、1.95±0.33倍，以后隨時間延長逐漸恢復(fù)。共培養(yǎng)48h時，與空白對照相比，miR-200c表達(dá)仍然是降低的（P均＜0.05）。同時，H.pylori顯著提高了4株胃癌細(xì)胞株AGS、BGC-823、HGC-27、SGC-7901中RhoA mRNA和蛋白的表達(dá)(P均＜0.05);4株胃癌細(xì)胞RhoA mRNA表達(dá)分別在24h、48h

7、、24h、12h達(dá)最高，分別升高為1.72±0.22、1.94±0.27、1.97±0.26、1.63±0.30倍，以后隨時間延長逐漸恢復(fù);4株細(xì)胞的RhoA蛋白分別在24h、24h、12h、24h達(dá)最高，分別升高4.43±0.06、5.86±0.14、4.84±0.94、7.5±0.01倍，以后隨時間延長逐漸恢復(fù)。
　　3.提高4株胃癌細(xì)胞中miR-200c的表達(dá)，RhoA mRNA表達(dá)均無明顯改變，但RhoA蛋白的表達(dá)均顯著降

8、低（P均＜0.05）;降低4株胃癌細(xì)胞中miR-200c的表達(dá)，RhoA mRNA的表達(dá)同樣沒有明顯變化，但RhoA蛋白的表達(dá)均顯著提高（P均＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.H.pylori能夠降低胃癌細(xì)胞中miR-200c的表達(dá)、提高RhoA的表達(dá)。
　　2.改變胃癌細(xì)胞中miR-200c表達(dá)，可以影響RhoA蛋白表達(dá)，并且miR-200c的表達(dá)與RhoA蛋白的表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)。
　　3.H.pylori可能