幽門(mén)螺桿菌ggt基因的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞的影響.pdf

1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文幽門(mén)螺桿菌ggt基因的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞的影響姓名：孔梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：張尤歷20100610江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文D N A 轉(zhuǎn)染家蠶細(xì)胞B m N ，獲得了重組病毒，即g g t 全長(zhǎng)( B m N P V - g g t ) 、去信號(hào)肽( B m N P V - d 3 0 a ) ，去N 端8 0 a a ( B m N P V - d 8 0 a ) ，去N 端3 8 0 a a( B m

2、N P V - d 3 8 0 a ) 及與g f p 融合表達(dá)的B m N P V - g g t ．g 邱，B m N P V - d 3 0 a - g f p ，B m N P V - d 8 0 a ．g f p 和B m N P V - d 3 8 0 a —g f p 等重組病毒，對(duì)插入的片段進(jìn)行驗(yàn)證，表明病毒攜帶了上述片段。( 2 ) g g t 各片段表達(dá)產(chǎn)物的活性與細(xì)胞定位：將各種病毒感染的細(xì)胞收集后，分析表達(dá)產(chǎn)物的

3、G G T 活性。結(jié)果表明，4 種感染了含不同長(zhǎng)度g g t 病毒的細(xì)胞液均能檢測(cè)到活性，其中B m N P V - g g t ·a l l ，B m N P V - g g t ·d 3 0 a ，B m N P V - g g t - d 8 0 a ，B m N P V - g g t - d 3 8 0 a的活性分別為3 ．6 1 ，1 0 ．5 0 ，l O ．0 3 和1 0 ．8 8U ／L ，而陰性

4、對(duì)照B m P a k 6的活性為O ．0 6 U ／L 。說(shuō)明病毒表達(dá)的g g t 各片段均有活性，其活性中心主要集中在C 端。經(jīng)w e s t e r n ．b l o t 證實(shí)了H p 的g g t 各片段與g f p 融合表達(dá)。融合片段在細(xì)胞中的定位表明，g g t 產(chǎn)物主要定位在胞質(zhì)中，當(dāng)N 端大部分去除后，表達(dá)產(chǎn)物出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。( 3 ) g g t 表達(dá)產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞的凋亡作用：通過(guò)J C ．1 染色分析，g g t 表達(dá)產(chǎn)物

5、可引起細(xì)胞線粒體膜電位變化，說(shuō)明該類表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)線粒體途徑介導(dǎo)細(xì)胞凋亡。全長(zhǎng)g g t 誘導(dǎo)的S f 2 1細(xì)胞的凋亡作用很明顯，并且C 端融合其他片段也不影響這種作用。( 4 ) g g t 表達(dá)產(chǎn)物抑制胃癌細(xì)胞B G C ．8 2 3 的生長(zhǎng)：采用M T T 法檢測(cè)g g t 表達(dá)產(chǎn)物對(duì)胃癌細(xì)胞B G C ．8 2 3 生長(zhǎng)影響的結(jié)果說(shuō)明，只有全長(zhǎng)g g t 具有明顯的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，而這種作用只在刺激的初期明顯，隨時(shí)間的延