紅花種質(zhì)資源的SRAP分子鑒定及其與品質(zhì)相關(guān)的分子標(biāo)記研究.pdf

1、紅花(CarthamustinctoriusL.)是菊科(Compositae)紅花屬中唯一的栽培種。在我國(guó)，紅花的干燥管狀花，是傳統(tǒng)的活血化瘀中藥，具有活血通經(jīng)，去瘀止痛之功效。 由于長(zhǎng)期的自然選擇和人工選擇的結(jié)果，紅花種內(nèi)產(chǎn)生了明顯的分化，形成了豐富的種質(zhì)資源。不同紅花品種從外部的形態(tài)特征到內(nèi)部的化學(xué)成分組成及含量上均呈現(xiàn)出很大的差異，這為紅花的品種選育提供了豐富的遺傳基礎(chǔ)，也為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)紅花的利用價(jià)值提供了更多的選擇。單憑

2、表型性狀的差異進(jìn)行選擇已不能滿足紅花育種工作的需要。本研究運(yùn)用SRAP(sequence-relatedamplifiedpolymorphism，SRAP)標(biāo)記對(duì)包括野生種在內(nèi)的25個(gè)紅花品種的遺傳多樣性進(jìn)行了分析，從分子水平對(duì)紅花種質(zhì)資源進(jìn)行了鑒定；同時(shí)篩選與紅花中藥用有效成分(羥基黃色素A)含量高低相關(guān)的分子標(biāo)記，其主要結(jié)果如下： 一、利用優(yōu)化后的SRAP體系用30對(duì)引物對(duì)25個(gè)紅花品種的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，多態(tài)性

3、好的9對(duì)引物共擴(kuò)增出483條帶，其中多態(tài)性帶274條，平均每對(duì)引物可擴(kuò)增出53條DNA片斷，30條多態(tài)性帶，占總位點(diǎn)的57％。聚類分析結(jié)果表明，在GS為0.29時(shí)，25個(gè)紅花品種被分成兩類，除13號(hào)野生種和4號(hào)栽培品種聚在一起外，野生種和其他栽培種完全分開(kāi)。二者不僅在生物學(xué)性狀上相似，而且不同引物的擴(kuò)增條帶中幾乎都出現(xiàn)相同的帶型，因此，我們推測(cè)4號(hào)品種可能來(lái)源于野生種綿毛紅花。GS值為0.43時(shí)，25個(gè)紅花品種被聚為六類，4號(hào)栽培品種和

4、13號(hào)野生種綿毛紅花聚在一起外，其它栽培種則分成五類。在栽培品種間整體遺傳相似系數(shù)較低，利用引物的不同組合，可明顯區(qū)分不同品種。 二、在此基礎(chǔ)上，對(duì)區(qū)別于栽培種和野生種的特異性條帶進(jìn)行回收測(cè)序，四對(duì)引物共擴(kuò)增出5條特異性條帶，即SPW237，SPW219，SPW371，SPW292，SPW206。其精確長(zhǎng)度分別為：237bp、219bp、371bp和292bp、206bp。這些特異性條帶序列的獲得，為栽培種紅花(Carthamu

5、stinctoriusL.)與野生種綿毛紅花(CarthamuslanatusL.)的分子鑒別提供了有效途徑。 三、采用HPLC法，對(duì)紅花親本及雜交F2代植株的羥基黃色素A含量進(jìn)行綜合分析，結(jié)果表明，F(xiàn)2代各植株含量呈連續(xù)性變異，紅花羥基黃色素A含量為主-多效基因控制的數(shù)量性狀。在此基礎(chǔ)上，采用BSA法建立了羥基黃色素A品質(zhì)性狀的極端基因池，利用優(yōu)化后的紅花SRAP反應(yīng)體系對(duì)基因池用182對(duì)引物反復(fù)篩選，得到與紅花品質(zhì)相關(guān)的3條