參附注射液及其有效成分人參皂苷Re的減毒作用機制研究.pdf

1、參附方是臨床常用的經典名方，主要由人參、附子兩味藥組成。參附注射由人參和附子的提取物制成，人參有抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、改善心腦血管系統(tǒng)功能和提高機體免疫力等藥理作用;附片有強心、升壓、抗休克、抗血栓形成、抗缺氧、抗心肌缺血、抗緩慢性心律失常等藥理作用。參附注射液對于心血管疾病等多個方面均有良好效應，經過古今諸多醫(yī)家的臨證實踐確證其療效顯著;然而，對于參附注射液內涵的機制研究卻寥寥無幾[1-2]。本研究以參附注射液為研究對象，通過體內外

2、實驗探討參附注射液減毒機制，為臨床安全、合理用藥提供參考。
　　研究方法:本實驗在動物水平采用靜脈注射烏頭堿20μg/kg誘發(fā)大鼠心律失常，觀察參附注射液對心律失常的影響;實驗分組采用陽性對照胺碘酮組15mg/kg、受試藥人參組0.5g/kg、附片組0.5g/kg、參附組0.75g/kg。隨后從心肌細胞水平研究參附注射液的減毒作用，在實驗過程中，人參、附片和參附注射液分別單獨處理心肌細胞，觀察細胞存活率、LDH釋放率、原代心肌細胞

3、搏動頻率、Caspase3/7酶活性和細胞凋亡。利用實驗室構建的PXR-CYP3A4穩(wěn)定轉染HepG2工程細胞株結合報告基因技術，篩選參附注射液中誘導或抑制PXR-CYP3A4通路的化學成分，并從酶活性水平進行確證。最后從心肌細胞水平研究單體人參皂苷Re及烏頭堿對CYP酶在mRNA及蛋白水平的影響，同時檢測人參皂苷Re對下游凋亡基因mRNA水平的影響。
　　實驗結果:1）烏頭堿模型組心率先加快后減慢，參附組和胺碘酮治療組心率均出現(xiàn)

4、顯著性下降，Q-T間期和P-R間期明顯延長。參附組，人參組和胺碘酮治療組均能推遲房性早搏發(fā)生時間。2）參附注射液(37，75mg/mL)處理后的H9c2心肌細胞存活率要高于附片注射液。與附片注射液相比，參附注射液(75mg/mL)處理后的H9c2心肌細胞LDH釋放率顯著降低。參附注射液(150mg/mL)處理4h時顯著減輕了附片注射液(100mg/mL)誘導的原代心肌細胞自發(fā)搏動頻率。與附片注射液(12，25mg/mL)相比，參附注射液

5、(18，37mg/mL)有效降低了Caspase3/7酶活性。細胞凋亡檢測也同樣表明參附注射液(9，37mg/mL)導致的細胞凋亡要小于附片注射液(6，25mg/mL);可為參附注射液減毒提供依據(jù)，但其減毒的深入機制需進一步研究。3）與溶劑對照組比較，人參皂苷Rc、Rf、 Rb2、Rg2、F2、F1、Re50μmol/L處理30、48和60h時，誘導倍數(shù)差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中在藥物濃度200μmol/L組處理48和60

6、 h時，人參皂苷Rb2、Rg2、F1組誘導倍數(shù)均顯著高于RIF陽性對照組(P＜0.05)。酶活性的研究結果表明，在48h時，人參皂苷Rc、Rf、 Rb2、F2、F1可以增加CYP3A4酶活性(P＜0.05)。4)隨著濃度和時間的增加，人參皂苷Re對CYP2C11、CYP2J3 mRNA水平均有良好的誘導作用，對CYP4A1 mRNA水平均有良好的抑制作用;對CYP4A1蛋白水平也具有良好的抑制作用。人參皂苷Re對于下游凋亡基因Bcl-2