艾迪注射液中人參、黃芪、刺五加提取物對(duì)斑蝥增效減毒的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討艾迪注射液中人參、黃芪和刺五加提取物對(duì)斑蝥的增效減毒作用及其機(jī)制研究。
　　 方法:采用MTT法考察人參、黃芪、刺五加提取物對(duì)斑蝥提取物引起的腫瘤細(xì)胞（SMMC-7721肝癌細(xì)胞、Hela宮頸癌細(xì)胞、U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞）和正常大鼠腎細(xì)胞(NRK細(xì)胞)毒作用的影響，同時(shí)觀察SMMC-7721和NRK細(xì)胞形態(tài)的變化;采用小鼠肝癌H22模型，觀察人參、黃芪、刺五加提取物對(duì)斑蝥提取物體內(nèi)抑制腫瘤的增效作用;采用斑蝥造成大鼠急

2、性腎損傷模型，考察人參、黃芪、刺五加提取物對(duì)腎損傷的保護(hù)作用;采用ATP酶試劑盒檢測SMMC-7721、NRK細(xì)胞內(nèi)Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶活力;采用LDH試劑盒檢測SMMC-7721、NRK細(xì)胞外LDH酶活力;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測SMMC-7721和NRK細(xì)胞凋亡;hoechst33342染色觀察SMMC-7721凋亡細(xì)胞形態(tài)變化;電鏡觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)變化;采用western blot法檢測Bcl-2和Caspa

3、se-3等凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:MTT結(jié)果顯示人參、黃芪、刺五加提取物可提高斑蝥對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用;人參(0.66，1.33mg/kg)、黃芪(0.28，0.55mg/kg)、刺五加(0.53，1.05mg/kg)對(duì)斑蝥(0.04mg/kg)體內(nèi)抑制H22移植瘤有增效作用(q＞0.85);人參（385.00，770.00μg/ml）和黃芪提取物(32.00μg/ml)可明顯增加斑蝥（1.25μg/ml，以斑蝥素

4、計(jì)算）引起的SMMC-7721細(xì)胞LDH活力的升高(p＜0.05)，人參提取物（385.00，770.00μg/ml）明顯增強(qiáng)由斑蝥引起SMMC-7721細(xì)胞Na+K-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶活力的下降;人參（385.00，770.00μg/ml）、黃芪(32.00μg/ml)及刺五加(76.50μg/ml)提取物能明顯增強(qiáng)斑蝥(1.25 g/ml)引起SMMC-7721細(xì)胞凋亡(p＜0.05);人參（770.00μg/ml

5、）、黃芪(32.00μg/ml)可明顯加強(qiáng)斑蝥素所致SMMC-7721細(xì)胞中bcl-2的下調(diào)作用、caspase-3的上調(diào)作用。
　　 斑蝥在0.31-5.00μg/ml范圍內(nèi)明顯降低NRK細(xì)胞存活率，呈劑量依賴性;人參提取物(24.25，48.50μg/ml)、黃芪提取物(4.00，8.00μg/ml)、刺五加提取物(9.56μg/ml)降低斑蝥對(duì)NRK細(xì)胞毒作用;斑蝥(0.14 mg/kg，i.p.)連續(xù)15天給藥能使大鼠形

6、成急性腎臟損傷，大鼠尿量減少，尿蛋白升高，血清肌酐、尿素氮含量升高，病理切片顯示大鼠腎臟腎小球出現(xiàn)萎縮，腎遠(yuǎn)曲小管水腫;人參(1.59，3.19 mg/kg)、黃芪(0.66，1.32 mg/kg)、刺五加(1.58，3.16mg/kg)提取物可降低斑蝥(0.14mg/kg)所致腎損傷大鼠的尿素氮、肌酐含量，減少尿液中尿蛋白含量，改善腎小球壞死、遠(yuǎn)曲小管水腫狀態(tài)，抑制腎小管細(xì)胞凋亡;人參(24.25，48.50μg/ml)、黃芪（4.0

7、0μg/ml）、刺五加(9.56μg/ml)可明顯減少斑蝥（1.25μg/ml）引起的NRK細(xì)胞LDH活力的升高(p＜0.05)，保護(hù)由斑蝥引起NRK細(xì)胞Na+K-ATP酶和Ca2+Mg2+-ATP酶活力的降低;人參(24.25，48.50μg/ml)、黃芪(4.00，8.00μg/ml)和刺五加（9.56，19.13μg/ml）提取物能抑制斑蝥（1.25μg/ml）引起NRK細(xì)胞凋亡;人參(24.25μg/ml)、黃芪(4.00μg/