COPD患者外周血Rho激酶水平測定的臨床意義.pdf

1、研究背景：
　　慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種重要的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，患病人數(shù)多，病死率高。由于其緩慢進(jìn)行性發(fā)展，嚴(yán)重影響患者的勞動能力和生活質(zhì)量。COPD患者在急性發(fā)作期過后，臨床癥狀雖有所緩解，但其肺功能仍在繼續(xù)惡化，并且由于自身防御和免疫功能的降低以及外界各種有害因素的影響，經(jīng)常反復(fù)發(fā)作，而逐漸產(chǎn)生各種心肺并發(fā)癥。世界衛(wèi)生組織認(rèn)為，慢性阻塞性肺疾病可以預(yù)防，但目前無法治愈。治療有助于減緩病情發(fā)展，但這一疾病通常在一段時間

2、后逐漸惡化。氣道炎癥是COPD的起始階段，氣道重塑是COPD氣流阻塞的病理基礎(chǔ)，是COPD病變持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵因素。因此，研究其病理改變及發(fā)生機(jī)制對改善其防治效果及患者預(yù)后具有重要意義。慢性阻塞性肺疾病的一個重要的合并癥就是肺動脈高壓，慢性阻塞性肺疾病合并肺動脈高壓是逐漸發(fā)生和緩慢進(jìn)展的，肺動脈高壓是慢性阻塞性肺疾病發(fā)展至肺源性心臟病的重要病理生理過程，如果肺動脈壓持續(xù)升高，可導(dǎo)致右心負(fù)荷增加，最終導(dǎo)致右心衰竭。
　　研究表明Rho

3、/Rho激酶信號通路是機(jī)體各組織細(xì)胞普遍存在的一條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其通路的關(guān)鍵信號分子包括：Rho蛋白、Rho激酶和肌球蛋白磷酸酶。其通過調(diào)節(jié)細(xì)胞肌動蛋白骨架的聚合狀態(tài)，參與調(diào)控了細(xì)胞形態(tài)維持、細(xì)胞粘附與遷移、細(xì)胞增殖與凋亡、基因轉(zhuǎn)錄、平滑肌收縮等多種生物學(xué)行為，介導(dǎo)了多種平滑肌與非平滑肌功能異常相關(guān)疾病的發(fā)生機(jī)制。在多種疾病動物模型平滑肌細(xì)胞中均存在Rho激酶的過多表達(dá)。Rho/Rho激酶信號通路參與了COPD的發(fā)病過程，Rho激酶抑制

4、劑可抑制炎癥細(xì)胞的遷移和趨化、拮抗炎性因子分泌，阻斷炎性因子作用，從而發(fā)揮抗炎作用，改善氣道重塑。
　　本研究主要研究 Rho/Rho激酶信號通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)及COPD伴發(fā)肺動脈高壓（PAH）患者血清Rho激酶1（ROCK1）及外周血單核細(xì)胞ROCK1的表達(dá)變化,為臨床防治COPD提供依據(jù),為COPD及伴發(fā)肺動脈高壓提供新的治療靶點(diǎn)。
　　目的：
　　通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)及細(xì)胞流式儀技術(shù)等

5、檢測方法，檢測正常人群、慢性阻塞性肺疾病(COPD)伴發(fā)或不伴發(fā)肺動脈高壓（PAH）患者的血清和外周血單核細(xì)胞中的Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白1（ROCK1）的表達(dá)變化，探討Rho/Rho激酶信號通路在COPD伴發(fā)或不伴發(fā)PAH患者發(fā)病中的作用。
　　方法：
　　1.研究對象
　　收集2010年1月~2011年1月在廣州市第一人民醫(yī)院鶴洞分院收治的COPD患者40例，其中COPD患者20例，COPD伴發(fā)肺動脈高壓(PAH)

6、患者20例，其中COPD患者組符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸分會2007年制定的慢性阻塞性肺疾病診治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)；COPD伴發(fā)肺動脈高壓患者組同時符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸分會2007年制定的慢性阻塞性肺疾病診治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)及ESC2009年制定的肺動脈高壓診斷與治療指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)。另取在本院體檢中心健康體檢者20例作為對照組。三組在年齡、性別、體重上盡量匹配。
　　2.肺功能測定
　　所有研究對象均需進(jìn)行肺功能檢測，主要的檢測指標(biāo)包括用力

7、肺活量（FVC）、第一秒用力呼氣容積（FEV1）、FEV1/FVC及FEV1占預(yù)計值的百分比（FEV1％）、吸入支氣管擴(kuò)張劑（沙丁胺醇400ug）后的FEV1/FCV。
　　3.肺動脈平均壓的測定
　　所有研究對象均通過心臟彩色多普勒超聲檢查，測得安靜狀態(tài)下的肺動脈平均壓（mPAP）。
　　4.血清ROCK1的表達(dá)水平檢測
　　4.1標(biāo)本采集：抽取研究對象空腹靜脈血3ml，離心(3000R/15min.20℃)，

8、留取上層血清1ml,于低溫－80℃冰箱中保存待測。
　　4.2測定方法：血清ROCK1的表達(dá)水平檢測方法為酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），其中標(biāo)本處理、測定方法和樣本濃度計算均按照相關(guān)試劑盒說明書進(jìn)行。
　　5.外周血單核細(xì)胞ROCK1的表達(dá)水平檢測
　　5.1.標(biāo)本采集：抽取研究對象空腹靜脈血20ml，以改進(jìn)的Ficoll-Hypaque密度分離法和塑料吸附法分離出單核細(xì)胞，于低溫－80℃冰箱中保存待測。
　　5

9、.2測定方法：采用流式細(xì)胞儀檢測研究對象的外周血單核細(xì)胞 ROCK1的表達(dá)水平。其中標(biāo)本處理、測定方法和樣本濃度計算均按照相關(guān)試劑盒說明書進(jìn)行。
　　結(jié)果：
　　1.血清ROCK1表達(dá)水平在對照組、COPD組、COPD伴發(fā)PAH組分別為13.10±2.67、23.55±4.97和36.72±7.18 pmol/L，COPD組、COPD伴發(fā)PAH組明顯高于對照組。三組之間存在顯著性差異（P<0.01）。
　　2.外周血單

10、核細(xì)胞ROCK1表達(dá)水平在對照組、COPD組、COPD伴發(fā)PAH組分別為3.61±2.44%、10.56±3.72%和31.21±8.83%，統(tǒng)計學(xué)分析顯示三組之間存在顯著性差異（P<0.01）。
　　3.相關(guān)性分析顯示受試者血清ROCK1水平與肺動脈平均壓呈正相關(guān)（r=0.654，P<0.05），外周血單核細(xì)胞 ROCK1表達(dá)水平與肺動脈平均壓亦呈正相關(guān)（r=0.664，P<0.05），血清ROCK1水平與外周血單核細(xì)胞ROCK